Mitokondriyal genomun HV1 HV2 ileri değişken bölgelerinin adli amaçlı dizinlenmesi

Abstract

ÖZET Adli olguların aydınlatılmasında sıklıkla eser miktarda biyolojik materyalin DNA düzeyinde incelenmesi gerekir. Bu tür örneklerde yeterli miktarda nükleer DNA ya ulaşmak her zaman mümkün olamamaktadır. Mitokondrilerin içinde bulunan ve ileri derecede değişkenlik gösteren mt DNA her hücrede en az 100 kopya halinde bulunduğundan çok daha doğru ve kolay bir şekilde sonuca ulaşmamıza yardımcı olur. Nükleer DNA ile incelenmesi çok zor olan eski kemikler, ileri derecede degrade olmuş biyolojik materyal veya tek ve köksüz kıl örneklerinde, mt DNA ile büyük başarı elde edilmektedir. Bunun dışında, anne tarafından kalıtılan mtDNAnın incelenmesi, kişilerin akrabalıklarının belirlenmesinde sıklıkla başvurulan bir tekniktir. Ülkemizde faaliyette bulunan kriminal laboratuvarlarda halen bu alanda bir çalışma yoktur. Bu nedenle çalışmamızda gerek yöntemin standardizasyonunun sağlanması gerekse toplumumuzda varolan mutasyonlarla ilgili bir ön bilgi edinmeyi amaçlamaktayız. Çalışmamızda mitokondrial genomun ileri değişken HVR1 ve HVR bölümlerinin dizin analizi tekniği ile belirlenmesi ve dizin farklılıklanmn istatistiksel değerlendirilmesi yapılamıştır. HVR1 ve HVR2 mt DNA dizin analizlerinin gerçekleştirilmesi için akrabalık ilişkileri olmayan 20 kişiden alman kan örnğinden DNA çekitlenerek incelenmişir. Çalışma, gerekli DNA çekitleme yöntemi ile başlamış, hedef bölgelerinPCR amplifikasyonundan sonra PCR ürünlerinin işaretlenmiş primerlerle dizinlenmeye hazır hale getirilmiştir. Dizin analizi laser deteksyon sistemine dayalı, otomatik DNA dizin analizi cihazı kullanılarak gerçekleştirilmiştir.

SUMMARY It is not always possible to obtain enough nuclear DNA for the analysis of the biological samples for forensic evaluation. The polymorphic DNA found in the mitochondria exist at least in hundred copies and it makes easy to obtain results. Where it is not possible to work with nuclear DNA, for example ancient bones, any degraded biological material, hair shaft, mtDNA gives successful results. Besides, due to maternal inheritance of the mtDNA it is useful for the investigation of kinship. The aim of this project is to standardize the method for the analysis of the mtDNA and to get data about the mutations of the Turkish population. The HV1 and HV2 regions of the mtDNA were sequenced and the haplotypes were evaluated statistically. Blood samples were collected from 20 unrelated individuals and the DNA was extracted. The target regions were amplified by means of PCR and then the products were sequenced by using appropriate labeling for the laser induced fluorescence method. The capillary electrophoresis was done by the automated sequencing instrument.