Değişik balık türlerinden saflaştırılan karbonik anhidraz enzimi üzerine bazı pestisitlerin etkilerinin araştırılması

Abstract

oz DEĞİŞİK BALIK TÜRLERİNDEN SAFLAŞTHULAN KARBONDX ANHİDRAZ ENZİMİ ÜZERİNE BAZI PESTİSİTLERİN ETKİLERİNİN ARAŞTIRILMASI » Semra IŞDX Balıkesir Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü, Kimya Anabilim Dalı (Yüksek Lisans Tezi / Tez Danışmanı : Doç. Dr. Oktay ARSLAN) Balıkesir, 2002 Bu çalışmanın birinci bölümünde beş farklı tür balık {Cyprinus carpio, Barbus barbus, Salmo gairdnerü, Diplodus vulgaris ve Scorpaena porcus ) eritrositlerinden elde edilen karbonik anhidraz enzimi üzerine bazı pestisitlerin inhibisyon etkileri araştırılmıştır. Bu pestisitler Rubigan [2,4'-dikloro-a-(pirimidin- 5-yl) benzhidril alkol], Metidol [0,0-dimetil O-4-nitrofenil fosfortioat ], Super amin' a [(2,4-diklorfenoksi) asetik asit dimetil amonyum] ve Trimidal [2-kloro- 4'-fluoro-a-(pirimidin-5-yl) benzhidril alkol] bileşikleridir. Etkisi araştırılan bu pestisitlerin tümü, sözkonusu balık eritrositlerinden elde edilen karbonik anhidraz enzimleri üzerinde değişik düzeylerde inhibisyona neden olduğu bulunmuştur. I5o değerleri 0,18-3,19 mM aralığındadır. Scorpaena porcus eritrositlerinden elde edilen karbonik anhidraz enziminin kullanılan bu pestisitlere karşı duyarlı olduğu bulunurken, daha kirli sularda yaşayan Cyprinus carpio ve Barbus barbus eritrositlerinden elde edilen karbonik anhidraz enzimlerinin ise söz konusu pestisitlere karşı daha dirençli olduğu saptanmıştır.Araştırmamızın ikinci bölümünde ise, afinite jeli (Sepharose-4B-L-tirozin-p- aminobenzensülfonamid) kullanarak Cyprirms carpio eritrositlerinden karbonik anhidraz enzimi saflaştınldı. Saflaştırma derecesi 3 14 kat olarak tespit edildi. SDS- PAGE uygulanarak saf enzim tek bir bant olarak gözlendi. Km ve Vmax değerleri sırasıyla 1,49 mM ve 8,62 U/ml.min olarak bulundu. ANAHTAR SÖZCÜKLER: karbonik anhidraz / pestisit / inihibisyon / enzim aktivitesi / saflaştırma / afinite kromatografisi

ABSTRACT INVESTIGATION OF THE EFFECTS OF SOME PESTICIDES ON CARBONIC ANHYDRASE ENZYME OBTAINED FROM THE DIFFERENT FISH SPECIES Semra IŞIK Balikesir University, Institute of Science, Department of Chemistry (MSc. Thesis / Supervisor : Assoc. Prof. Dr. Oktay ARSLAN) Balikesir-Turkey, 2002 The inhibition effects of some pesticides were investigated on carbonic anhydrase which obtained from five different fish species {Cyprinus carpio, Barbus barbus, Salmo gairdnerii, Diplodus vulgaris and Scorpaena porcus). These pesticides were Rubigan [2,4'-dicWoro-a-(pyrimidin-5-yl) benzhydryl alcohol], Metidol [0,0-dimethyl O-4-nitro phenyl phosphorothioate], Super amin'a [(2,4- dichlorphenoxy) acetic acid dimethyl ammonium] and Trimidal [2-chloro-4'-fluoro- a-(pyrimidin-5-yl) benzhydryl alcohol]. The carbonic anhydrase was inhibited by all the pesticides in different levels. The I50 values were between 0. 18-3. 19 mM range. The enzyme which was isolated from Scorpaena porcus fish was more sensitive than the other fish species. The carbonic anhydrase enzymes which were obtained from Cyprinus carpio and Barbus barbus that living in dirty water, were more resistant than the others. In the second stage of this study, carbonic anhydrase enzyme has been purified from erythrocytes of Cyprinus carpio using an affinity gel ( Sepharose 4B- L-tyrosine p-aminobenzensulfonamide). The purification level was 314 fold. The meluates were separated through a SDS polyacrylamide gel electrophoresis and the pure enzyme was observed as a single band. The Km and Vmax values of Cyprimis carpio carbonic anhydrase were calculated as 1.49 mM and 8.6 U/ml.min for p-nitrophenlyacetate, respectively. KEY WORDS: carbonic anhydrase / pesticide / inihibition effect / enzyme activity / purification / affinity chromatography IV