Adeno virüslerle indüklenen fare lenfositlerinin (T. A.) hücrelerdeki mikroçekirdek indüksiyonunun belirlenmesi

Abstract

ÖZET ADENO VİRÜSLERLE İNDÜKLENEN FARE LENFOSİT, (T.A.) HÜCRELERİNDEKİ MİKROÇEKİRDEK İNDÜKSİYONUNUN BELİRLENMESİ Özlem GEÇER Balıkesir Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Biyoloji Anabilim Dalı (Yükseklisans Tezi / Tez Danışmanı : Yrd. Doç. Dr. Mehmet KORKMAZ) Balıkesir, 2003 İzmir Bölge Hıfzıssıhha Enstitüsü'ne gelen polio virüs şüpheli ve akut flask paralizi bulgusu bulunan veya temaslısı olan 24 kişiden alman gaita örneğinde yapılan ön çalışmalarda adeno virus tespit edildi. Bu izolatlar daha sonra Hollanda' daki bölge referans laboratuarı olan RIVM'e (National Institue for Public Health and the Environment) gönderildi, adeno virus olduğu doğrulandı. Hücre kültürü yöntemiyle, fare lenfosit hücresi orijinli olan T. A hücreleri kullanılarak odacıklı lamlar içinde hazırlanan hücreler üzerine adeno virüs izolatları eklendi ve oluşan sitopatik etkiler değerlendirildikten sonra 20 ve 24 saatlik inkubasyonlann ardından preperatlar tespit edilerek May~Greunwald-Giemsa boya yöntemi ile boyandı. Rasgele seçilen sahalardan sayılan 1000 hücre içindeki mikroçekirdek sayılan bulunarak istatistiksel olarak değerlendirildi. Mikroçekirdek indüksiyonu yönünden, 20 ve 24 saatlik denemeler birbirinden bağımsız olarak kontrole göre anlamlı çıkmasına karşın (p< 0.005), deney gruplarının kendi içinde karşılaştırılması anlamlı sonuç vermemiştir (p> 0.005). Yaptığımız çalışmada negatif kontrol olarak virüs eklenmemiş hücre kontrolleri, pozitif kontrol olarak da apoptozu ve mikroçekirdeği indüklediği bilinen Mitomisin C kullanıldı. Ayrıca başka bir deney düzeneğinde T.A hücrelerinde, adeno virüslerin apoptozu indüklediği gösterildi. Sonuç olarak, adeno virüslerin 20 saatlik inkübasyonunun, yeterli oranda mikroçekirdek indüksiyonuna neden olduğu ve apoptozla mikroçekirdek sayılan yönünden aralannda bir korelasyon olduğunu düşündürmektedir. ANAHTAR SÖZCÜKLER: Adeno virüs / mikroçekirdek / hücre kültürü / May- Greunwald - Giemsa boya yöntemi / apoptoz / mitomisin C

ABSTRACT : DETERMINATION OF MICRONUCLEUS INDUCTION IN ADENO VIRUS INDUCED T.A. CELLS (Mouse lymphocyte cells) Ozlem Gecer Balıkesir University, institute of Science, Department of Biology Master of Science / Thesis advisor: Assistant Professor Mehmet Korkmaz Balıkesir 2003 In stool samples of 24 subjects who were suspected for poliomyelitis because of associated flaks paralysis or who were in close contact with such people, the presence of adenovirus was determined at Hıfzıssıhha Institue of İzmir Region. These isolations were also confirmed at RTVM which is a regional reference laboratory in Holland ( National Institute for Public Health and the Environment). Adeno virus isolates were added to the T.A. cells derived from mouse lymphocyte with cell culture. After evaluation of the cytopathic effects, the preparations were fixed after incubation of 20-24 h and stained with May-Greunwald Giemsa for determining the number of micronucleus in 1000 cells from different areas and evaluated statistically. When compared with control group, the induction of micronucleus was significantly increased in experimental groups (p< 0,05), whereas intergroups comparions between the experimental groups did not exhibit indiference (P>0,05), as induction of micronucleus. In the present study, cell controls with no virus addition and Mitomisin C which was known to induce apoptosis and micronucleus were used for negative and positive controls, respectively. Besides in another experimental protocol adenoviruses were shown to induce apoptosis T.A cells. In conclusion incubation of adeno viruses for 20 hours causes of induction of adequate amount of micronucleus and there is a correlation between apoptosis and the number of micronucleus. Key Words: Adenovirus / micronucleus / cell culture / May-Greunwald Giemsa staining / apoptosis / mitomycin C u