Pyrus elaegrifolia meyvesinden polifenol oksidaz enziminin afinite kromatografisi ile saflaştırılması ve bazı kinetik özelliklerinin incelenmesi

Abstract

oz Pyrus elaegrifolia MEYVESİNDEN POLIFENOL OKSİDAZ ENZİMİNİN AFİNİTE KROMATOGRAFİSİ İLE SAFLAŞTIRILMASI VE BAZI KİNETİK ÖZELLİKLERİNİN İNCELENMESİ Fatma Ülker YERLİTÜRK Balıkesir Üniversitesi Fen Bilimleri Enstitüsü Kimya Anabilim Dalı (Yüksek Lisans Tezi / Tez Danışmanı : Prof.Dr.Oktay ARSLAN) Bu çalışmada Pyrus elaegrifolia 'dm. ekstrakte edilen polifenol oksidaz enzimi afinite kromatografisi ile saflaştırılarak bazı kinetik özellikleri incelenmiştir. Enzimin saflığı, SDS-Poliakrilamid jel elektroforezi ile kontrol edilmiştir. Katekol substratı kullanılarak Pyrus elaegrifolia polifenol oksidaz (PePPO) enziminin aktivitesi üzerine sıcaklık ve pH'ın etkisi araştırılmıştır. PePPO enziminin optimum pH:6.0 ve sıcaklığı 35 °C olarak bulunmuştur. PePPO enziminin optimum pH ve sıcaklıkta katekol substratı için Km ve Vmax değerleri Lineweaver-Burk yöntemi ile belirlenmiştir. Bu değerler sırası ile 6,6x1 0`3 M ve 1 1000 U olarak bulunmuştur. Saflaştırılan enzim üzerinde glutatyon, p-aminobenzoik asit,etilen glikol ve L-sistein bileşiklerinin etkisi incelenmiştir. En etkili inhibitörün p-aminobenzoik asit olduğu saptanmıştır. ANAHTAR SÖZCÜKLER: Pyrus elaegrifolia; polifenol oksidaz; afinite kromatografisi; inhibisyon; optimum pH ve sıcaklık.

ABSTRACT PURIFICATION OF POLYPHENOL OXIDASE FROM Pyrus elaegrifolia FRUIT BY AFINTY CHROMATOGRAPHY AND CHARACTERIZATION OF ITS SOME KINETIC PROPERTIES Fatma Ülker YERLITURK Balıkesir University, Institute of Science, Department of Chemistry ( Master Thesis/ Supervisor : Prof. Dr. Oktay ARSLAN Bahkesir-September, 2003 In this study, the polyphenol oxidase en2yme was extracted from wild pear by afinity chromatography and its some kinetic properties was examined. The purity of purified enzyme was confirmed by SDS gel electrophoresis. The effects of temperature and pH on the activity of wild pear polyphenol oxidase enzyme was investigated by using catechol as substrat. Optimum pH and optimum temperature of PePPO enzyme were found as 6.00 and 35° C, respectively. Km and Vmax values of PePPO enzyme in optimum pH and temperature were determined by using Lineweaver-Burk method for catechol as substrat. The values were found as 6.6x1 0`3 M and 1 1000 U, respectively. The effects of glutatyon, p-aminobenzoic acid, ethylene glikol and L-cystein chemicals on purificated enzyme were also investigated The most effective inhibitor was found as p-aminobenzoic acid. KEY WORDS: Wild pear; polyphenol oxidase; afinity chromatography; inhibition; optimum pH and temperature, pyrus elaegrifolia.