Farklı salvia tomentosa ekstraktlarının C6 glioma monolayer ve sferoid hücre kültürü modelinde antitümör etkisinin belirlenmesi

Abstract

ÖZET FARKLI SALVIA TOMENTOSA EKSTRAKTLARININ C6 GLIOMA MONOLAYER VE SFEROİD HÜCRE KÜLTÜRÜ MODELİNDE ANTITUMOR ETKİSİNİN BELİRLENMESİ Seçnur DENİR Balıkesir Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü Biyoloji Anabilim Dalı (Yüksek Lisans Tezi/ Tez Danışmanı: Doç Dr. Feray KOÇKAR) Bahkesir,2005 Salvia tomentosa halk arasında hazımsızlık, larenjit, farenjit, ağız mukozası iltihabı, dişeti iltihabı, dil iltihabı, aşın terleme ve sütün çok fazla gelmesine karşı kullanılan bir bitkidir. Halk arasında bu kadar yaygın bir şekilde kullanılan bu bitkinin antimikrobial ve antioksidant etkisi konusunda çalışmalar bulunmasına rağmen doku kültüründe antitumor aktivitesi üzerine herhangi bir çalışma mevcut değildir. Salvia miltiorr hiza* mn mevcut antitumor aktivitesi, halk arasında şifasma inanılan Salvia tomentosa' ma. da böyle bir elkinliğinin olabileceğini akla getirmektedir. Bu çalışmada C6 glioma hücrelerinde, tek tabakalı ve üç boyutlu tümör hücre kültürleri kullanılarak; metanol, petrol eteri ve kloroform çözücüleri ile elde edilmiş üç ayrı Salvia tomentosa ekstraktımn antitumor etkinliğine bakılmıştır. Ekstraktlann hücre populasyonundaki artışa etkisi monolayer kültürlerde ekstraktlann 100 ug/ml, 10 ug/ml ve 1 ug/ml'lik konsantrasyonları kullanılarak 24, 48 ve 72 saatlik inkübasyonlarda hemasitometre ile hücre sayımı yapılarak gerçekleştirilmiştir. Sonuçlardan istatistiki olarak anlamlı bulunan değerlerin yüksek konsantrasyonları seçilerek bu konsantrasyonlar üç boyutlu hücre kültürlerinde 48 saat inkübasyona maruz bırakılmışlardır. Bu sürenin son bir saatinde BrdU ile inkübe edilen sferoidlerden hazırlanan parafin kesitlerin bir kısmına immünohistokimya uygulanarak BrdU İşaretlenme İndeksi hesaplanmış bir kısmına ise hematoksilen- eozin boyası uygulanarak genel sferoid morfolojisi değerlendMlmiştir. Sonuç olarak Salvia tomentosd'mn C6 hücreleri üzerinde az da olsa hücre populasyonunda büyümeyi inhibe edici etkiye sahip olduğu, BrdU İşaretlenme İndeksini kontrole göre anlamlı olarak azalttığı ve genel sferoid morfolojisinde de yer yer dağılmalara sebep olduğu gözlenmiştir. Anahtar Sözcükler: Salvia tomentosa, antitumor aktivite, hücre kültürü, C6 glioma, sferoid, monolayer ıı

ABSTRACT DETERMINATION OF ANTITUMOR EFFECTS OF DIFFERENT SALVIA TOMENTOSA EXTRACTS ON MONOLAYER AND SPHEROID MODEL OF C6 GLIOMA CELLS Seçnur DENİR Balıkesir University, Institute of Science, Department of Biology (Msc. Thesis / Supervisor: Assoc. Prof. Dr. Feray KOÇKAR) Balıkesir, 2005 Salvia tomentosa that belongs to Salvia genus is widely used in public for the treatment of several diseases, e.g. inflammation of mouth, sore throats. It is also beleived it has antitumor properties in some part of Turkey. Infact, another Salvia species, Salvia miltiorrhiza was demonstrated to have antiproliferative effects on some tumor types. Although some studies are avaliable for antimicrobial and antioxidant properties of this plant, there is no such study available on antiproliferative and antitumor activity of this species in cell culture. Therefore, the aim of the study is to investigate the antitumor activity of three different whole plant extracts, namely methanol, petrolium ether and chloroform extracts, on rat C6 glioma cells using monolayer cell culture and multicellular spheroid model. In monolayer cells, the antiproliferative effect of the extracts on cell population was determined using cell counting in three different concentrations, 100 ug/ml, 10 ug/ml and 1 ug/ml, for 24h, 48h and 72 h incubation periods. The highest and statistically significant concentrations obtained from monolayer results were chosen for three dimensional spheroid model for 48 hours. At the end of this period, spheroids model was evaluated in two ways: Firstly, BrdU Labelling Index was immunohistochemically determined using microscopy of parafine slices prepared from BrdU labelled spheroids. Secondly, hematoxylen-eosine staining procedure has been performed for the evalulation of general morphology of spheroids. Consequently, it was observed that Salvia tomentosa has an antiproliferative effect on C6 glioma cell population and the values obtained from BrdU Labelling Index of all chosen extracts in spheroid model was statitically significantly compared to control spheroids and more interestingly the chosen S. tomentosa extracts resulted in the dispersal on the morphology of spheroids cells. Key words: Salvia tomentosa, antitumor activity, cellculture, C6 glioma, spheroid, monolayer m