Prostatik adenokarsinomalarda immunohistokimyasal yolla fas, fasl, flıp ve TRAİL-R3 analizi

Abstract

Apopitoz sürecinin prostat glandının normal fizyolojisinde oynadığı rol, apopitozun prostat kanseri gelişiminde de rol alabileceğine işaret etmektedir. Prostat karsinogenezinde apopitoz sürecinin birçok noktasında sapmalar olduğu gösterilmiştir. Bu çalışmada benign ve malign prostatik epitelyal lezyonlarda özellikle ekstrinsek apopitoz sürecini değerlendirerek, benign-malign prostat parankim lezyonları spektrumunda apopitoz sürecindeki değişimleri ortaya koymaya çalıştık.Çalışmaya Patoloji Anabilim Dalı arşivinde yer alan 2007-2011 yılları arasında tanısı konmuş 20 BPH, 20 LGPİN, 8 HGPİN ve 82 PCa dâhil edildi. PCa grubu Gleason grade kategorilerine göre; 26 olgu (%31,7) grade II, 24 olgu (%29,3) grade III ve 32 olgu (%39) grade IV olacak şekilde dağılım gösterdi. Apopitoz süreci Fas, FasL, TRAIL-R3 (DcR1) ve FLIP primer antikorları ile immünohistokimyasal yolla analiz edildi. Fas ve FasL analizlerinin değerlendirilmesinde boyanma yaygınlığı ve şiddeti semikantitatif olarak ayrı ayrı değerlendirildi ve her iki skor toplanarak total skor belirlendi. Total skoru 4 ve üzeri olanlar pozitif olarak kabul edildi. Fas ve FasL antikorları için hem glandüler alanlar hem de stromal alanlar ayrı ayrı analize alındı. Analizler sırasında nükleer boyanmanın dikkati çekmesi nedeniyle glandüler alanlarda nükleer boyanma dikkate alındı, %10 ve üzeri değerler pozitif nükleer boyanma olarak kabul edildi. DcR1 ve FLIP glandüler alanlarda değerlendirildi. Glandüler alanların %5 ve üzeri pozitif sitoplazmik boyanmaları, FLIP ve DcR1için pozitif olarak kabul edildi. Verilerin analizinde tek yönlü varyans analizi (one-way ANOVA) ve Ki-kare testleri kullanıldı. İstatistiksel anlam, p<0.05 için kabul edildi.Tüm çalışma grubunda ortalama yaş 68,47, yaş aralığı 47-81 idi. Yaş analizinde gruplar arasında fark saptanmadı. Nükleer Fas ekspresyonu BPH' de %85, PCa'da %8,5 oranında idi (x2=62,641, P=0,0001). Stromal Fas ekspresyonu BPH grubunda %45, PCa grubunda %1,2 oranında saptandı (x2=45,968, P=0,0001). Glandüler FasL pozitifliği PCa' da %63,8 iken BPH' de %20 oranında izlendi (x2=15,424, P=0,001). BPH' de nükleer FasL ekspresyonu ise belirgin derecede daha yüksekti (x2=14,037, P=0,003). Stromal FasL ekspresyonu ise PCa olgularında daha düşüktü ancak fark anlamlı değildi. TRAIL-R3 (DcR1) ve FLIP ekspresyonu gruplar arasında anlamlı fark göstermedi ancak FLIP ekspresyonu HGPİN ve PCa' da daha yüksek oranlarda pozitifti. Kullanılan apopitoz belirteçlerinin PCa grubu içinde diferansiyasyon kategorilerine göre yapılan analizlerinde ise istatistiksel anlamlı bir ilişki saptanmadı.PCa' da stromal hücrelerin daha az Fas ekspresyonu buna karşın daha yüksek glandüler FasL pozitifliği, karsinogenez sürecinde epitelyal ve stromal hücrelerin apopitoza duyarlılıkları ve apopitozdan korunma yollarında değişiklik gösterdikleri savlarına destek verir niteliktedir. PCa' da FLIP ekspresyonu artışı da bu yönde yorumlanabilecek bir diğer bulgudur. Nükleer Fas/FasL ekspresyonu ve bunun benign ve malign gruplar arasında anlamlı fark göstermesi literatüre göre şimdiye kadar bildirilmemiştir.Anahtar kelimeler; prostat, karsinogenez, Fas, FasL, DcR1, FLIP

The role of apoptosis process in normal physiology of prostate gland is pointed that it might be a role in prostate carcinogenesis. Many aberrations in normal apoptosis process have been showed in prostate carcinogenesis. In this study, we want to reveal the probable changes in apoptosis process, especially extrinsic apoptosis route, in benign and malign lesions of prostate parenchyma.Twenty cases of BPH, 20 cases of LGPIN, 8 cases of HGPIN and 82 cases of PCa were included in this study. These cases were in archive of Department of Pathology and diagnosed by 2007 to 2011. PCa group were categorized by Gleason grade; 26 cases (31, 7%); grade II, 24 cases (29, 3%); grade III and 32 cases (39%); grade IV. Apoptosis process was immunohistochemically analyzed by primary antibodies of Fas, FasL, TRAIL-R3 (DcR1) and FLIP. In the evaluation of Fas and FasL analyses, extensivity and intensity of immunostaining were semiquantitatively evaluated. The scores of extensivity and intensity were sum and total score was obtained. Score of 4 and more ones than 4 were accepted as positive immunostaining. Both glandular and stromal areas for Fas and FasL antibodies were analyzed. Nuclear immunostaning in glandular areas were taken into consideration as nuclear staining was noted during the evaluation. Ten per cent and more than this value were accepted as positive nuclear immunostaining. DcR1 and FLIP were evaluated in glandular areas and more than 5% of cytoplasmic immunostaining in glandular areas was accepted as positive immunostaining for FLIP and DcR1. One-way ANOVA and Chi-square test were used for data analysis. Statistical significance was accepted for p<0, 05.The mean age was 68, 47 year. The ranges of age were 47-81 year. Age analysis did not show a significant relation. Nuclear Fas expression were 85% and 8, 5% in BPH and PCa, respectively (x2=62,641, P=0, 0001). Stromal Fas expression was determined 45% of cases in BPH, while only 1, 2% of cases of PCa showed stromal Fas positivity (x2=45,968, P=0, 0001). Glandular FasL positivity were seen in 63, 8% of PCa cases. The ratio of positivity for glandular FasL was 20% in BPH group (x2=15,424, P=0, 001). Nuclear FasL expression was evidently higher than those of other groups (x2=14,037, P=0,003). Stromal FasL expression was lower in PCa group but this difference had no statistical significance. The expressions of TRAIL-R3 (DcR1) and FLIP did not show any significant difference between the groups. Only FLIP expression was more frequently seen without a statistical significance in HGPIN and PCa groups. Markers related apoptosis process had no any statistical significant relationship according to the differentiation categories in PCa group.Findings of lower stromal Fas expression, on the other hand higher glandular FasL expression in PCa group support that the hypothesis which epithelial and stromal cells gained some changes in mechanisms of defense and sensitivity to apoptosis during carcinogenesis. Higher FLIP expression in PCa is also another finding supporting this opinionNuclear Fas/FasL expressions and the presence of significant differences for these expressions between benign and malign groups have not been informed up to now according to the literature.Key words: prostate, carcinogenesis, Fas, FasL, DcR1, FLIP