Modifiye bir french pres hücresinin yapımı ve bakteri parçalama özelliğinin incelenmesi

Abstract

Bu çalışmada modifiye bir Fransız presinin yapımı ve bu Fransız presinin E.coli (DH5?) hücrelerini parçalama işlemini ne kadar gerçekleştirebildiği araştırılmıştır. Ayrıca Fransız presi operasyonundan elde edilen sonuçlar sonikasyonla hücre parçalama sisteminden alınan sonuçlarla karşılaştırılmıştır. Öncelikle besiyerlerinde üretilen E. coli hücreleri santrifüjlenip TAE tampon çözeltisi ile değişik konsantrasyonlarda hücre çözeltileri hazırlanmıştır. Hazırlanan bu hücre çözeltileri Fransız presi ve sonikatör sistemleriyle parçalanmaya çalışılmıştır. Parçalama işlemi öncesinde hazırlanan çözeltilerin OD600'de absorbans değerleri ölçülmüştür. Daha sonra bu çözeltiler Fransız presinden geçirilmiş ve her geçişten sonra absorbansları aynı şekilde tekrar ölçülmüştür. Bu işlemin sonucunda absorbanslardaki değişikliğe göre hücrelerin parçalanma yüzdesi belirlenmiştir. Aynı işlemler sonikatör ile hücre parçalama sistemiyle de tekrarlanmıştır. Son olarak parçalama yüzdelerine bakılarak sonikatör ve Fransız presi sistemlerinin hücre parçalama becerileri karşılaştırılmıştır.

In this study, production of a modified French press and the percentage of lysis of E. coli cells (DH5?) by this french press are examined. In addition to this, the results obtained from French press and sonication are compared with each other. First of all, the E. coli cells produced in their cultures are centrifuged and then using by TAE buffer solutions, cell solutions at different concentrations are prepared. These solutions of E. coli cells are then tried to lyse with French press and sonication systems. Before these two operations, the absorbance values of these solutions of cells are determined at OD600. Then these solutions are passed through French press and their optical densities are determined again for every pass. At the end of this operation, percentage of lysis of cells in the solutions are determined by the difference in their absorbances. After these, the same operations are performed by the sonication method. At the end of this study, success of these French press and sonication methods are compared.