Limonin dehidrogenaz enziminin rekombinant DNA teknolojisiyle üretilmesi

Abstract

Turunçgil meyvelerinin sularında acılık önemli sorunlardandır. Naringin ve limonin bu sorunun kaynaklarından önemli iki etmeni oluşturmaktadır. Limonin turunçgil meyvelerindeki triterpenoid metabolizmasının ara ürünlerinden olan bir limonoiddir. Limonin dehidrogenaz enzimi 31977.03 dalton ağırlığındadır. Bu enzim turunçgil meyvelerinde bulunan limonoidlerden limoninin neden olduğu acılığı gideren bir enzimdir. Limoninin dilakton formuna karşı aktivite göstermektedir. Bu çalışmada limonin dehidrogenaz enziminin pET22b ve pTOLT vektörlerinde rekombinant DNA teknolojisi ile üretilmesi ve aktivite testlerinin yapılması hedeflenmektedir. Çalışmada ilk olarak biyoinformatik araçlar kullanılarak gen dizisi bulunmuştur ve bu dizinin kodon optimizasyonu gerçekleştirilmiştir. Gen yapay olarak sentezlettirilmiş, pET22b vektörü içerisinde elimize ulaşmıştır. Klonlama çalışmaları başarılı bir şekilde yapıldıktan sonra ekspresyon basamağına geçilmiştir. Rekombinant olarak elde edilen enzimin aktivite çalışmaları yapılmıştır. Sonuç olarak rekombinant olarak üretilen limonin dehidrogenaz enziminin portakal kabuğundan elde edilen limonin maddesine karşı aktif olduğu bu maddeyi parçaladığı spektorskopik yöntemler ile tayin edilmiştir.

Bitterness is an important problem in the juices of citrus fruits. Naringine and limonene are two important factors in the source of this problem. Limonin is a limonoid, an intermediate product of triterpenoid metabolism in citrus fruits. The enzyme limonene Dehydrogenase is 31977.03 dalton in weight. This enzyme is an enzyme that clears the limonoids found in citrus fruit, causing limonen. Limonen shows activity against dilactone form. In this study, production of lemon dehydrogenase enzyme with pET22b and pTOLT vectors by recombinant DNA technology and activity tests are aimed. Production by DNA technology and activity tests are targeted. In the study, genome sequence was first found using bioinformatic tools and codon optimization of this sequence was performed. The gene was artificially synthesized and sent in pET22b vector. After the cloning studies have been successfully carried out, the expression step has been reached. Activity studies were performed after the enzyme was obtained recombinantly. As a result, the recombinantly produced limonene dehydrogenase enzyme is active against the citron substance obtained from the orange shell, which is determined by spectroscopic methods that break up the substance.