Ekmeklik buğday (Triticum aestivum SSP. Vulgare) bitkisinden peroksidaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu

Abstract

Bu çalışmada POD farklı tekniklerle ekmeklik buğday (Triticum aestivum ssp. Vulgare)bitkisinden saflaştırıldı, karakterize edildi ve kinetik özelliklerinin yanısıra inhibisyonu daaraştırıldı. Buğdaydaki POD, (NH4)2SO4 çöktürme, diyaliz, CM-Sephadex ve jel filtrasyonkromatografileri kullanılarak saflaştırıldı. Saflaştırılan POD enziminin saflığını kontroletmek ve molekül kütlesini belirlemek için SDS-PAGE yapıldı ve molekül kütlesi 38.8 kDabulundu. Ham ekstredeki POD enzimi üzerine yapılan karakterizasyon çalışmalarındaoptimum pH, optimum iyonik şiddet, optimum sıcaklık ve stabil pH sırasıyla 5,5, 0.1 M, 40ºC, 6,5 olarak tespit edildi. Km ve Vmax değerleri Linewear-Burk grafiği çizilerek hesaplandı.Guaiakol ve H2O2 substratları için enzimin Km değerleri sırasıyla 2,467 ve 7,307 olarakbelirlendi. POD enzimi üzerine CTAB (setil trimetilamonyum bromür),EDTA(etilendiamintetra asetik asit), sitrik asit ve sodyum azidin inhibisyon etkisiincelenerek en yüksek inhibisyon etkisi CTAB ve sitrik asit (%95 ve %94 inhibisyon)gözlendi.

The purification and characterization of peroxidase is currently growing of interested sinceperoxidases have implications in various industrial and biochemical areas. In this study,wheat peroxidase was purified and characterized using different techniques. Peroxidase fromwheat was purified using (NH4)2SO4 precipitation, dialysis, CM-Sephadex anion exchangechromatography and SDS-gel electrophoresis. Enzyme kinetics were studied using twosubstrates: guaiacol and hydrogen peroxide. Km and Vmax values were calculated fromLineweaver-Burk graph for each substrate patterns. Km values for guaiacol and hydrogenperoxide were found as 2,467 and 7,307 respectively. Enzyme activity has been purified 284folds. The pH and optimum temperature were 5,5 and 40 °C, respectively. Peroxidase hadmolecular mass of 38,8 kDa as determined by SDS-PAGE. The enzyme was highly inhibitedby citric acid and setil trimetil amonyum bromür.