Ameliyat sonrası hastalara verilen bazı antibiyotiklerin insan serumundan saflaştırılan paraoksonaz-1 enziminin aktivitesi üzerine in vitro etkilerinin incelenmesi

Abstract

Paraoksonaz (PON1; E.C.3.1.8.1), karaciğerde sentezlenen, arildialkilfosfataz olarak da adlandırılan, yüksek yoğunluklu lipoprotein (HDL) ile ilişkili kalsiyum bağımlı Aesterazlar grubundan bir enzimdir. Bu çalışmada PON1 enzimi, insan serumundan amonyum sülfat çöktürmesi (%60-80 aralığında), DEAE-Sephadex A-50 iyon değişim kromatografisi ve Sephadex G-200 jel filtrasyon kromatografisi basamakları kullanılarak, %47,5 verimle yaklaşık 322,6 kat saflaştırıldı. Enzimin saflığı SDS poliakrilamid jel elektroforezi ile kontrol edilerek molekül kütlesi yaklaşık 43 kDa olarak belirlendi. Ayrıca çalışmamızda insan serum PON1 enzimi aktivitesi üzerine ameliyattan sonra verilen bazı antibiyotiklerin (fosfomisin, sefiksim, sefuroksim, sefaklor monohidrat) in vitro şartlarda etkileri incelendi. İnhibisyon etkisi gösteren bu ilaçların IC50 değerleri ve Ki sabitleri belirlendi. Düşük dozlarda farklı inhibisyon mekanizmaları ile enzimin aktivitesini inhibe ettiği görüldü. Bu antibiyotik ilaçlardan sefiksimin in vitro PON1 aktivitesini daha fazla düşürdüğü görüldü.

Paraoxonase (PON1; E.C.3.1.8.1) is an enzyme from the group of calcium-dependent A-esterases associated with high-density lipoprotein (HDL), also called aryldialylphosphatase synthesized in the liver. In this study, PON1 enzyme was purified from human serum with ammonium sulfate precipitation (in the range of 60-80%), DEAE-Sephadex A-50 ion exchange chromatography and Sephadex G-200 gel filtration chromatography steps to be approximately 322,6 fold with 47,5% yield. The purity of the enzyme was controlled by SDS polyacrylamide gel electrophoresis to determine the molecular mass of about 43 kDa. In our study, the effects of some antibiotic drugs (fosfomycin, cefixime, cefuroxime, cefaclor monohydrate) given after surgery on human serum PON1 enzyme activity were investigated in vitro. IC50 values and Ki constants of these drugs were determined. It was observed that inhibition of enzyme activity was effected by low inhibition mechanisms. It was observed that cefixim from these antibiotics decreased more in vitro PON1 activity.