Testisin stereolojik metodlar ile incelenmesinde farklı fiksatiflerin etkilerinin karşılaştırılması

Abstract

Testis dokusunun, histolojik açıdan değerlendirilip stereolojik metodlar ile ölçülmesi ve doku morfolojisini en iyi koruyan fiksatifi belirleyerek PAS (Periyodik Asit Shchiff), MTC (Masson Trichrom) ve TUNEL (TdT mediated dUTP Nick end Labeling) boyaları ile dokunun histolojik özelliklerinin belirlenmesi amaçlanmıştır.Çalışmamız da Sprague Dawley cinsi 20 adet sıçanın testis dokuları dört farklı fiksatif [%10 NTF (Nötral Tamponlu Formaldehit), BF (Bouin Fiksatifi), mDF (Modifield Davidson Fiksatifi) ve Stieve's Fiksatifi] ile fikse edildi. Fiksasyonun ardından testis dokuları, rutin doku takip işlemine alınıp, parafin bloklara gömüldü. Parafin bloklardan elde edilen 5 mikron kalınlığındaki seri kesitler HE (Hematoksilen-Eozin) boyandı. Her testis bloğundan birkaç lam PAS, MTC ve TUNEL boyaları ile boyanarak mikroskobik incelemeleri yapıldı. Seri kesitlerden elde edilen lamlar Cavalier Yöntemi ile testis dokularının hacim hesaplaması yapıldı.Çalışma sonucunda, mDF ve Stieve's Fiksatifleri ile çok az miktarda germ hücreleri arasında ve seminifer tübüllerde çok küçük bir büzülme artefaktı görülmüştür. Bouin Fiksatifi ile testisin merkezi alanlarında büzülme artefaktları görülmüştür. %10 NTF Fiksatifinin seminifer tübül yapılarında belirgin doku büzülme artefaktları görüldü. BF, mDF ve Stieve's Fiksatifleri tespit edilen testis dokularının nükleer detayları %10 NTF ile karşılaştırıldığında daha iyi sonuç alınmıştır. Testis dokusunun PAS, MTC ve TUNEL boyaları ile boyanması sonucu en iyi mDF ve Stieve's Fiksatifleri sağlamıştır alternatif olarak BF'yi tercih edilebilir. Testis dokusunun morfolojik korunumu ve boyanma özellikleri açısından mDF ve Stieve's Fiksatifleri ile daha iyi korunmanın sağlandığı gözlenmiştir. BF ile doku büzülme artefaktı daha belirgin gözlenmiş olsada sonuçların güvenilirliği açısından sorun belirtmediği için alternatif olarak tercih edilebilir. Testis dokusu %10 NTF fiksatifi hücresel korumasının kalitesi daha düşük olduğunu görülmüştür. Anahtar Kelimeler: Fiksatif, Hacim, Histokimyasal Boyama, Stereoloji, Testis.

The aim of this study was to determine the histological properties of testis tissue by histological evaluation and stereological methods and to determine the fixative that best preserves tissue morphology and to determine the histological properties of tissue with PAS (Periodic Acid Shchiff), MTC (Masson Trichrom) and TUNEL (TdT mediated dUTP Nick end Labeling) dyes.In our study, testicular tissues of 20 Sprague Dawley rats were fixed with four different fixatives [10% NTF (Neutral Buffer Formaldehyde), BF (Bouin Fixative), mDF (Modifield Davidson Fixative) and Stieve's Fixative] and saline. Following fixation, the testes were embedded in paraffin. Routine tissue was taken to follow-up. Serial sections of 5 micron thickness obtained from paraffin blocks were stained with HE (Hematoxylin-Eosin). Microscopic examination of each testis block was performed by staining with several PAS, MTC and TUNEL stains. The volume of the testicular tissues was calculated with the slides obtained from serial sections and Cavalier Method which is the Stereological Method.As a result of the study showed a very small shrinkage artifact between mDF and Stieve's Fixatives and a small amount of germ cells and seminiferous tubules. Shrinkage artifacts were observed in the central areas of the testis with Bouin Fixative. Significant tissue shrinkage artifacts were observed in seminiferous tubule structures of 10% NTF Fixative. BF, mDF and Stieve's Fixatives showed better nuclear results compared to 10% NTF. PAS, MTC and TUNEL staining of the testis resulted in the best mDF and Stieve's Fixatives. Alternatively, BF could be preferred.It was shown that mDF and Stieveındans fixatives are more protected in terms of morphological preservation and staining properties of testis tissue. Although tissue shrinkage artifact was more prominent with BF, we supported it with stereological measurement, which is not a problem in terms of the reliability of the results and could be preferred as an alternative. The quality of testicular tissue 10% NTF fixative cellular protection was lower.Key Words: Fixative, Volume, Histochemical Staining, Stereology, Testis.