Katalazın değişik materyaller üzerinde tutuklanma özelliklerinin incelenmesi

Abstract

Katalaz enzimi için silikajel kolon dolgu maddesi ve doğal bir polimer olan kitosan film üzerinde kovalent bağlanmayla, sefadeks G-100 kolon dolgu maddesi üzerinde iyonik bağlanmayla tutuklanma çalışmaları gerçekleştirildi. Serbest katalaz ve her üç destekte tutuklu katalaz için optimum sıcaklık, optimum pH, termal kararlılık, saklama kararlılığı, kullanım kararlılığı ve kinetik sabitlerin belirlenmesi çalışmaları gerçekleştirildi. Serbest katalaz ve her üç destekte tutuklu katalaz için optimum sıcaklık 25 °C olarak, optimum pH ise 7 olarak bulundu. Silikajelde tutuklu katalazın termal kararlılığı serbest katalaz, kitosan ve sefadeks üzerinde tutuklu kat al azın termal kararlılığından daha yüksek bulundu. Silikajelde tutuklu katalazın saklama kararlılığı serbest katalaz ve kullanılan diğer destek materyallerinde tutuklu katalazın saklama kararlılığından daha yüksek bulundu. Yine silikajelde tutuklu katalazın kullanım kararlılığı kitosan ve sefadeks üzerinde tutuklu katalazın kullanım kararlılığından daha yüksek bulundu. Serbest katalaz için Km = 25.16 mM, Vmax = 24042 ı*mol (dk mg protein)`1, silikajelde tutuklu katalaz için Km = 23.45 mM, Vmax = 1302 nmol (dk mg protein)-1, kitosan üzerinde tutuklu katalaz için Km = 27.67 mM, Vmax = 1022 [xmol (dk mg protein)`1 sefadeks üzerinde tutuklu katalaz için Km = 28.03 mM, Vmax = 6553 (xmol (dk mg protein)`1 olarak bulundu. Serbest katalaz ile diğer üç destekte tutuklu katalaz için Km değerlerinde yok denecek kadar küçük değişiklikler gözlenirken, serbest katalazın maksimum hızı ile her üç destekte tutuklu katalazın maksimum hızları arasında büyük fark olduğu, katalazın tutuklanmasıyla maksimum hızında düşüş meydana geldiği gözlendi.

Studies of immobilization for catalase were done both by covalent binding to the silica gel that is column packing material and chitosan film that is a natural polymer and by ionic binding to sephadex G-100 column packing material. Studies, for free catalase and immobilized catalase on every three support, concerning the determination of optimum temperature, optimum pH, thermal stability, storage stability, reusability and kinetic parameters were done. It was determined that optimum temperature for free catalase and immobilized catalase on every three support is 25 °C and optimum pH is 7. Thermal stability of immobilized catalase on silicagel was found to be higher than that of the free catalase, immobilized catalase on chitosan and sephadex. Storage stability of immobilized catalase on silica gel was found to be higher than that of free catalase and immobilized catalase on the other supporting materials used. In addition, reusability of the immobilized catalase on silica gel was found to be higher than that of the immobilized catalase on chitosan and sephadex. It was found as Km=25.16 mM Vmax=24042 (xmol (dk mg protein)-1 for the free catalase, Km=23.45 mM Vmax=1302 [xmol (dk mg protein)`1 for the immobilized catalase on silica gel, Km=27.67 mM Vmax=1022 [xmol (dk mg protein)-1 for immobilized catalase on chitosan, Km=28.03 mM Vmax=6553 (xmol (dk mg protein)`1 for the immobilized catalase on sephadex. It was obserwed that there was a big difference between Vmax of the free catalese and Vmax of the immobilized catalase on every three support while being observed minor changes in the value of Km for free catalase and the immobilized catalase on the other three support and that a fall in the Vmax of the catalase through immobilization.