Hamilelik sürecinde anne kalın bağırsak bakterileri 16S rDNA parmak izi

Abstract

Son zamanlardaki bulgular maternal kalın bağırsak mikroflorasının, fetal ve neonatal kalın bağırsak mikroflorasının oluşumunda temel kaynak olabileceğini göstermiştir. Bu bulgular doğrulandığı takdirde, anne kalın bağırsak mikroflorasının modüle edilebileceği ve bunun da bebek sağlığı üzerinde doğrudan bir etkisinin olabileceği savından yola çıkarak bakteriyoterapi ve probiyotikler konusunda yeni ufuklar açılabilir. Bu durumda hamilelik süresince anne kalın bağırsak mikroflorasının tanımlanması bu alanda yapılacak araştırmaların ilk basamağıdır. Bu çalışmada anne adaylarından her ay fekal örnekler alınmıştır. Doğrudan total genomik DNA ekstraksiyonunu takiben, PCR (polimeraz zincir reaksiyonu) ile bakteri 16S ribozomal RNA genleri çoğaltılmıştır. Çoğaltım ürünleri Hae III restriksiyon enzimi ile kesilmiştir. Kesim ürünleri elektroforez ile ayrıştırılmıştır. Bant profilleri, PAUP programı ile analiz edilmiştir. UPGMA dendrogramı, çalışılan bütün anne adaylarında belirli bir mikrofloranın varlığını işaret etmiştir. Bu sonuçlar, kontrol olarak hamile olmayan bireylerin fekal örnekleri, süt ve yenidoğan fekal örnekleri ile karşılaştırılacaktır. Bu karşılaştırmalı çalışmaların, üç farklı örnekleme grubu arasında paylaşılan yaygın bir endojen mikroflorayı işaret edeceği beklenmektedir.Anahtar kelimeler: Kalın bağırsak mikroflorası, 16S rRNA parmak izi, RFLP.

In recent years investigations have indicated that maternal intestinal flora could be the main source of fetal and neonatal intestinal flora. If these findings are verified, it will imply that modulation of the intestinal microflora of pregnants could have a direct effect on the health of infants and therefore would open new perspectives for bacteriotherapy and probiotics. Identification of intestinal microflora during pregnancy was the first step of investigations to be carried out in this area. In this study fecal samples were collected from pregnant woman every month. After total DNA extracts were prepared directly from samples, 16S rRNA genes were amplified by PCR (polymerase chain reaction). Amplification products were cut with Hae III restriction enzyme. Digestion products were resolved by electrophoresis. Banding patterns were analyzed using PAUP program. UPGMA dendrogram indicated the presence of a specific microflora in all the pregnant women studied. These results will be compared with random fecal samples from nonpregnant individuals as control and with human milk and newborn's fecal samples. These comparative studies are expected to indicate a common endogenous bacterial microflora shared within these three different sample groups.Keywords: Intestinal microflora, 16S rRNA fingerprinting, RFLP.