Anne sütünün bakteriyel analizi

Abstract

Anne sütü, neonatal bağırsak mikroflorasının kompozisyonunda, başlaması ve gelişiminde önemli bir faktördür. Anne sütünde bulunan bakterilerin orijini tartışılmaktadır ve en azından bazı türlerin maternal bağırsaktan meme bezlerine içsel olarak taşınıyor olabileceği önerilmiştir. Bu tür hipotezler tartışılır olabilir ancak bu büyüleyici alanda ileriki araştırmaları tetikleyebilir. Bu çalışmada, hamile bireylerden doğuma kadar her ay fekal örnekler, doğumdan sonra ise, iki haftada bir düzenli olarak süt örnekleri alındı. Doğrudan total DNA özütlemesini takiben PCR (polimeraz zincir reaksiyonu) ile bakteri 16S ribozomal RNA genleri çoğaltıldı. Çoğaltım ürünleri Taq I, Hae III restriksiyon enzimleri ile kesildi. Kesim ürünleri PAGE (poliakrilamit jel elektroforezi) ile ayrıştırıldı. Bant profillerinden bir veri matrisi oluşturuldu ve PAUP programı ile analiz edildi. Oluşturulan UPGMA dendrogramı kontrol, fekal ve süt örnekleri arasında ortak bir mikrofloranın varlığına işaret etmiştir. Sonrasında veriler SPSS programı yardımıyla frekans dağılımı, ki-kare (?2) ve korelasyon testleri ile analiz edildi. Süt örneklerinden elde edilen sonuçlar birbirleriyle, kontrol olarak annelerin kendi fekal örnekleriyle ve hamile olmayan kontrol bireylerin fekal örnekleri ile karşılaştırıldı. Sonuç olarak, süt örnekleri arasında kişisel farklara rağmen, istatistiksel olarak anlamlı benzerlikler görüldü. Annelerin sütleri ve fekal örnekleri kıyaslandığında ise üç kişide istatistiksel açıdan anlamlı benzerlikler görüldü, diğer beş kişide benzerlikler istatistiksel açıdan anlamlı bulunmadı.Anahtar kelimeler: 16S rRNA geni, anne sütü, yenidoğan, mikroflora.

Human milk is an important factor in the initiation, development and composition of the neonatal gut microflora. The origin of the bacteria found in human milk is debated and it is suggested that, at least, some species may be endogenously delivered from the maternal gut to the mammary gland. However such hypothesis can be a subject of controversy, it should stimulate further research in this fascinating area. In this study fecal samples were collected from pregnant women every month until the delivery, after delivery breast-milk samples were collected every fortnight. Following the directly total DNA extraction procedure, 16 S rRNA genes of bacteria were amplified by PCR (polymerase chain reaction). Amplification products were cut with Taq I and Hae III restriction enzymes. Digestion products were resolved by PAGE (polyacrylamide gel electrophoresis). A data matrix was formed from band patterns and analyzed by PAUP programme. The resulting UPGMA dendrogram has implied a common microflora between control, fecal and milk samples. Then, data were analyzed with frequency distribution, chi-square (?2) and correlation by using SPSS programme. Human milk results were compared with each others, mothers? fecal samples and control fecal samples from randomly chosen non-pregnant individuals. In conclusion, although personal differences between the milk samples, statically significant similarities were observed. In the case of the comparison of mothers? milk and fecal samples, significant similarities were observed in three person but other five persons? similarities were insignificant.Keywords: 16S rRNA gene, breast-milk, newborn, microflora.