Farelerde sepsis modelinde rekombinant insan aktive protein C tedavisinin apoptozis üzerine etkisi

Abstract

VII. ÖZET Sepsis, tetikleyici primer hasardan çok bu hasara gösterilen sistemik inflamatuar yanıta bağlı olarak gelişir. Inflamatuar yanıtın kendisi hasarın şiddetlenmesine ve sonunda çoklu organ yetmezliklerine yol açar. Son yıllarda yapılan çalışmalarda sepsis patogenezinde inflamasyonun yanı sıra apoptozisin rolü de gösterilmiştir. Bu çalışmada sepsis tedavisinde kullanılan rhAPC'nin deneysel sepsis modelinde inflamasyon ve apoptozis üzerine etkilerini inceleyerek hücresel düzeyde etkinliği araştırmak amaçlandı. 30 adet fare; kontrol grubu, sepsis grubu ve tedavi grubu olmak üzere 3 ayrı gruba ayrıldı. Kontrol grubuna herhangi bir enjeksiyon veya tedavi uygulanmadı. Intraperitoneal LPS verilerek oluşturulan sepsis grubuna herhangi bir tedavi uygulanmadı. Geri kalan 10 fareye ise intraperitoneal LPS verildikten 1 saat sonra rhAPC enjekte edilerek tedavi grubu oluşturuldu. LPS verildikten 24 saat sonra farelerden kan ve doku örnekleri alındı. Sepsis grubunda belirgin polimorfonükleer lökosit infiltrasyonu izlenirken tedavi ile bu infiltrasyonun gerilediği saptandı. eNOS immünoreaktiviteleri açısından gruplar açısında fark saptanmazken İNOS immünoreaktivitesinin sepsis grubunda şiddetli pozitif olduğu ve tedavi ile gerilediği görüldü. Kaspaz immünoreaktiviteleri karşılaştırıldığında kontrol grubunda her 3 tip kaspaz immunoreaktivitesine rastlanmazken, sepsis grubunda her üç kaspaz ekspresyonunun arttığı ve kaspaz 8 ve 9 un kaspaz 6 ya oranla daha fazla arttığı saptandı. Tedavi grubunda ise her üç kaspaz ekspresyonlarmda tedavi sonucunda azalma olduğu ve kaspaz 8 immünoreaktivitesinin kontrol grubu ile benzer olduğu saptandı. Gruplar arasında TNF-a ve IL-6 sonuçları karşılaştırıldığında sepsis grubunda akciğer dokusu, BAL ve kanda TNF-a, akciğer doku ve BAL IL-6 seviyelerinin kontrol 49grubuna oranla anlamlı olarak arttığı, tedavi verilen grupta ise sadece kan TNF- a düzeyindeki artışın anlamlı olarak gerilediği bulundu. Apoptotik hücrelerin belirlendiği TÜNEL yöntemi ile sepsis grubunda apoptotik hücre sayısının anlamlı düzeyde artış gösterdiği tedavi ile de bu artışın gerilediği görüldü. Sonuç olarak rhAPC'nin sepsiste antiinflamatuar etkilerinin yanı sıra antiapoptotik etkili olduğu gösterildi.

VIII. EFFECTS OF RECOMBINANT HUMAN ACTIVATED PROTEIN C ON APOPTOSIS AT EXPERIMENTAL SEPSIS MODEL IN MICE Sepsis develops due to systemic inflammatory response rather than the primary injury induced. Systemic inflamatuar response itself, causes the injury to become more severe and multiple organ failure consequently. Recent studies show that apoptosis, as well as inflammation, also plays role in the pathogenesis of sepsis. This study aimed to evaluate the efficacy of rhAPC at celluler level by examing the effects of it on inflammation and apoptosis on experimental sepsis model. Thirty mice was divided into three groups: control, sepsis and treatment group. No injection or therapy was applied to control group. In sepsis group intraperitoneal LPS was applied and no therapy had been given. The rest ten mice were given intraperitoneal LPS and after 1 hour rhAPC was injected treatment group. 24 hours after LPS injection blood and tissue samples were taken from the mice. In sepsis group significant polymorphonuclear leukocyte infiltration was seen, and after therapy this infiltration was regressed. For eNOS immunoreactivities, no difference was determined between groups. iNOS immunoreactivities was significantly positive in sepsis group and this reactivity regressed after therapy. When caspase immunoreactivities were compared; in control group no caspase immunoreactivitiy was determined whereas in sepsis group all of three caspase immunoreactivities were increased and caspase 8, 9 were increased more than caspase 6. In treatment group, all of three caspase immunoreactivities decreased with therapy and caspase 8 51grubuna oranla anlamlı olarak arttığı, tedavi verilen grupta ise sadece kan TNF- a düzeyindeki artışın anlamlı olarak gerilediği bulundu. Apoptotik hücrelerin belirlendiği TÜNEL yöntemi ile sepsis grubunda apoptotik hücre sayısının anlamlı düzeyde artış gösterdiği tedavi ile de bu artışın gerilediği görüldü. Sonuç olarak rhAPC'nin sepsiste antiinflamatuar etkilerinin yanı sıra antiapoptotik etkili olduğu gösterildi.