Kreatin kinaz izozimlerinin sıçan kalbinden saflaştırılması kinetik özelliklerinin ve nitrozolu karsinojen bileşiklerin etkilerinin araştırılması

Abstract

50 VI. ÖZET Kansej etkeni olarak bilinen nitrozolu bileşiklerin ; önemli bir meme'i enzimi olan, kreatin kinaz izozimlerine olan etkilerinin incelen mesi amaçlanan bu tez çalışmasında, sıçan kalp dokusundan saflaştırı- lan enzim kullanıldı. Saflaştırma işleminde, homojenizasyon, uitrasantri- fügasyon, etanol doygunluğu, diyaliz ve iyon seçici kolan kromatografisi teknikleri uygulandı- ' Saflaştırılan enzimin sübstratlarıyla olan ilişkisi incelenerek, 10 mM kreatin fosfat ve 0,1 mM ADP-GIutatyon derişimlerinde enzimin maksimum aktivite verdiği tesbit edildi. Ayrıca 37°C da ve pH 7,2 - 9 arası maksimum aktivite gözlendi. Enzim derişimi enzim hızına karşı gra- fiklendiğinde, doğrusallığın bozulmadığı görüldü. Kreatin kinaz izozimlerine, nitrozolu bileşiklerin etkisi ince lendi. CK-MM izozimini % 50 inhibe eden DEN A dozu 2 mM, NP dozu 0,5 mM ve NM dozu 0,5 mM olarak bulunmuştur. CK- MB izozimini % 50 inhibe eden inhibitor dozları ise sırasıyla 2,3; 0,4; 0,55 mM dır. CK-BB izo zimini % 50 inhibe eden inhibitor dozları da 2,1; 0,6 ve 0,4 mM dır. Bu sonuçlara göre NP ve NM'in inhibitor etkisi DENA'dan 3 kat daha fazladır. Ancak her 3 nitrozolu bileşiğin de kreatin kinaz enzimini inhi be ettiği tesbit edilmiş ve bulgular, kaynak bilgilerle tartışılmıştır.

51 SHE INVESTIGATION OK CREAÎIHE KINASE ISOZYMES OTKFIED FROM MOUSE LIVER, KINETIC PROPERTIES AND THE EFFECTS OF CARCINOGEN NITROSO COMPOUNDS* VII SUMMARY In this study, the effects of nitroso compounds which are known as carcinogenic, were examined on the creatine kinase isozy mes that an important mamaiian enzyme. For this purpose the enzy me purified from rat hearth tissue by homogenization, ultracentrifuga- tion, ethanol saturation, dialysis and ion selective column chromatog raphy techniques. It was studied the affinity of the purified enzyme with its substrates and effects the activity of temperature and pH. The maxi mum activity of the enzyme was obtained at the concentration of 10 mM Creatine phosphate and 0.1 mM ADP-glutation and at 37°C and pH 7-2-9. The piot of the enzyme concentration versus reaction velocity was found to be linear. DENA, NP and NM concentrations inhibiting 50 % of CK-MM izosyme were determined as 2.0, 0,5 and 0.5 mM, respectively. I50 va lues for the same nitroso compounds were found for CK-MB as 2.3, 0.4, 0.55 mM and for CK-BB as 2.1, Q.Q, 0.4, mM respectively. From the se results have been appeared that the inhibition effect of NP and NM, as to be 4 to 5 fold higher than that of DENA. In consequence, it was found that all nitroso compounds used in this study inhibited the enzyme in various degrees and the re sults were discussed with the literature data.