5-Azo deoksisitidin`in ( Baz analogu) insan 11,16 ve X kromozomları üzerindeki etkisinin C ve bromodeoksi uridin (BrdU) bant teknikleriyle araştırılması

Abstract

6. ÖZET Araştırmada, 50* si 46,XX ve 50'si 46, XY karyotipinde toplam 100 bi reyin MC Coy 5A besiortamında lenfosit hücre kültürleri yapılmıştır. Kül tür ortamlarına, bazı talasemi grupları ve orak hücreli anemi tedavisinde kullanılan ve bir baz analogu olan 5-Azo deoksisitidin (5-Azo dC), beş de ğişik sürede (2,12,24,48 ve 72 saat) ve 10`8-10-2 M derişimlerinde eklen miştir. Ajan aynı zamanda bir metilasyon inhibitörüdür. 5-Azo dC'nin yanısıra birbaşka baz analogu olan 5-Bromo 2'-deoksiu- ridin'in [(5-BrdU) ve (Timin analogu)] 10 ng/ml'lik sabit bir dozu kontrol ve deney grubu kültür ortamlarına üç farklı sürede (24, 48 ve 72 saat) eklen miştir. Standart preparasyon yöntemi (makrometod) kullanılarak preparatlar hazırlanmış ve metafaz kromozomlarının detaylı analizleri için G (GTG), C (CBG) ve BrdU bant tekniklerinden yararlanılmıştır. Yapılan inceleme sonunda, ajanın DNA'yı demetile ettiği saptanmış tır. Bu durum, kromozom yapılarında saptanan dekondansasyon (kromozom 1, 16, ve X), segmentasyon ve dekonfigürasyon (yaklaşık bütün kromo zomlarda) varlığından anlaşılmıştır. Kromozomların fakültatif, sentromerik heterokro matin ve satellit tip DNA bölgelerinde, dekondansasyon ve ankondansasyon belirlenmiştir. Bu nun yaraşıra belli grup kromozomlarda kümeleşme ile birlikte D ve G grup kromozomlarda satellit tip DNA 'ya bağlı asosiasyon artışı görülmüştür. Bunlar, telomerik DNA asosiasyonu ve jukstasentromerik asosiasyonlar o- larak tanımlanmıştır. 5- Azo dC'nin sitidinle yer değiştirerek kromozom-kromatin kondan- sasyonunu bozduğu gözlenmiştir. Kromozomun ajan ile yer değiştiren siti- dince zengin bölgelerinin, hipometilasyona bağlı olarak kondansasyonunu tamamlayamadıkları ve dekondanse formda kaldıkları saptanmıştır. Metilasyon, kromatinin kromozom şeklinde paketlenmesinde etkili bir mekanizmadır. Ajanın insan kromozomlarında en etkili dozunun 10` ^M ve sürenin ise 72 saatlik uygulama olduğu bulunmuştur.

INVESTIGATION ON THE EFFECT OF 5- AZA DEOXYCYTI- DINE (Base analogue) ON HUMAN 11, 16 AND X CHROMOSOMES, USING C AND BROMODEOXY URIDINE (BrdU) BANDING TECHNIQUES. 7- SUMMARY In this work, lymphocyte cell cultures of a total of 100 healthy sub jects (50 with 46, XX and 50 with XY karyotypes) were made using Mc Coy 5 A medium. 5- Aza deoxycytidine, a base analogue used in the treatment of some groups of thalasemia and sickle cell anemia was added into the culture' me dium at 10`° - 10 `^ M concentrations in five different times i.e at hours 2,12,24,48 and 72. The agent is also a methylation inhibitor. 5- Aza deoxycytidine, another base analogue, 5- Bromo 2'de deoxyu- ridine (5- BrdU and (Thymine analogue) have also been added into the culture medium. Standard preparation method (Macromethod) have been used in the preparetion of slides and G (GTG), C (CBG) and BrdU banding techniques for a detailed examination of methaphase chromoseomes. Following investigation, it has been established that the agent brought about DNA demethylation. Such a conclusion was reached upon deconden sation of 1,16 and X Chromosomes, segmentation and deconfiguration of nearly all the chromosomes. Decondensation and acondensation have been determined in the facultative, centromeric heterochromatine and satellite type DNA regions of the chromosomes. In addition, heaping of some gro ups of chromosomes and an increase in chromosomal association due to DNA in the D an group G chromosomes have also been determined. These have been defined as telomeric and juxtacentromeric association. It has been observed that 5-Aza dC substituted cytidine, causing up setting of chromosomal condensation. It has also been established that chromosomal regions rich in cytidine substituting the agent failed to comp lete condensation due to hypomethylation and remained decondensed.81 It has been concluded following this investigation that methylation is an effective mechanism in chromosomal packaging. The most effective do se of the agent on human chromosomes was determined to be 10'^M, opti mum time of application being 72 hours.