Bazı nitrozaminlerin glutatyon S-transferaz enzimi üzerindeki in vitro etkileri ve bağlanma özellikleri

Abstract

ÖZET Bu çalışmada nitrozolu bileşiklerden Dietilnitrozamin (DENA), Dimetilnitrozamin (DMN) ve N-Nitrozopirolidin'in (NPYR) glutatyon S-Transferaz (GST) enzim aktivitesine olan in vitro etkilerinin incelenmesi amaçlandı. Deneylerde enzim aktivite tayini için enzimin katalizle diği glutatyon ile l-kloro-2,4 dinitrobenzen'in (CDNB) konju- gasyon tepkimesi spektrofotometrik olarak izlenerek bulundu. GST enzimini %50 inhibe eden DENA, DMN ve NPYR derişimleri sırasıyla 10.0 mM, 25.0 mM ve 23.0 mM olarak gözlendi. Enzimin Km değeri 0.044 mM, Vmax değeri 3.39 umol/dk mg protein olarak bulundu. Enzimin DENA etkileşimi sonucunda Km ve Vmax değerleri sırasıyla; 4 mM DENA ile; 0.049mM, 2.45 umol/dk mg protein 8.3 mM DENA ile; 0.047mM, 1.87 umol/dk mg protein 1.6 mM DENA ile; 0.045mM, 1.38 umol/dk mg protein olarak saptandı. Enzimin DMN ile etkileşimi sonucunda Km ve Vmax değerleri sırasıyla; 5 mM DMN ile 0.043 mM, 3.16 umol/dk mg protein; 7.5 mM DMN ile 0.041 mM, 2.60 umol/dk mg protein; 25 mM DMN ile 0.043 mM, 1.67 umol/dk mg protein olarak bulundu. 37Enzimin NPYR ile etkileşimi sonucunda Km ve Vmax değerleri sırasıyla; 4 mM NPYR ile 0.048 mM, 3.29 umol/dk mg protein; 13.3 mM NPYR ile 0.045 mM, 2.37 umol/dk mg protein; 25 mM NPYR ile 0.046 mM, 1.67umol/dk mg protein olarak saptandı. Bu sonuçlar nitroz amini erin enzimin Km değerini de ğiştirmediğini, Vmax değerinde değişiklik yaptığını gösterdi. Enzim Vmax değerinin değişmesi nitro zam inlerin enzimi non- kompetetif olarak inhibe ettiğini göstermektedir. Dalga boyla rı taranarak elde edilen fark spektrumunda nitrozlu bileşikle rin bir kısmının enzime bağlandığı belirlenmiştir. 38

SUMMARY In this study we aimed at studying in vitro effects on glutathione S-transferase activity of nitroso compounds; di- ethylnitrosamine (DENA), dimethylnitrosamine (DMN) and with N-nitrosopyrrolidine (NPYR). l-Choloro-2,4 dinitrobenzene (CDNB) conjugation reac tion with glutathione cat ali zed by enzyme for the determinati on of enzyme activity was found by spectrofotometric study. DENA, DMN and NPYR concentrations which inhibits GST enzyme 50% were observed as 10.0 mM, 25.0 mM and 23.0 mM, respectively. The Km value of enzyme was found 0.044 mM and Vmax value as 3.39 umol/min mg protein. As a result of DENA mutual effect, Km and Vmax values were res pectively determined as; with 4 mM DENA; 0.049 mM, 2.45 umol/min mg protein with 8.3 mM DENA; 0.047 mM, 1.87umol/min mg protein with 1.6 mM DENA; 0.045 mM,1.38 umol/min mg protein As a result of interaction of enzyme with DMN, the Km and Vmax values was respectively found as; with 5 mM DMN; 0.043 mM, 3.16 imol/min mg protein; with 7.5 mM DMN; 0.041 mM, 2.6 umol/min mg protein; with 25 mM DMN; 0.043 mM, 1.67 umol/min mg protein. As a result of interaction of enzyme with NPYR, the Km and Vmax values was respectively found as; 39with 4 mM NPYR; 0.048 mM, 3.29 umol/min mg protein, with 13.3 mM NPYR; 0.045 mM, 2. 3 7 umol/min mg protein, with 25 mM NPYR; 0.046 mM, 1.67 umol/min mg protein. Such results showed that; nitros amines did not change the Km value of enzyme. The change of Vmax value of enzyme shows that nitrosamine inhibit enzyme noncompetetively. It was determine that some of nitroso compounds were bound to the enzyme on the differential spectrum obtained by scanning wavelength. 40