Toprak ve su örneklerinden özgür yaşayan amiplerin soyutulması, tanımlanması, özelliklerinin belirlenmesi ve patojenliklerinin araştırılması

Abstract

ÖZET Sivas'ta farklı çevrelerden alınan su ve toprak örneklerinde özgür yaşayan amiplerin (ÖYA) varlığı ve özellikleri araştırıldı. İzolasyon çalışmalarımızda yüzeyine Escheria coli sürülmüş besleyici değeri olmayan agar (BDOA) plakları kullanıldı. İzole edilen amiplerin trofozoit ve kist morfolojilerine göre cins ayrımları yapıldıktan sonra farklı sıcaklıklarda üreme durumları, boyanma özellikleri, aksenik besiyerinde üreyip üremedikleri ve fareler için patojen olup olmadıkları araştırıldı. Araştırmamızda farklı bölgelerden aldığımız toplam 7 örnek incelendi ve bu örneklerin 5'inden ÖYA izole edildi (%70.1). Amip izole ettiğimiz 5 örneğin birinde Naegleria cinsi amip (%20), ikisinde leptomyxid amip ile birlikte Acanthamoeba cinsi (%40), diğer iki örnekte ise farklı Acanthamoeba türleri (%40) üredi. Buna göre toplam olarak 5 örneğin 4'ünde (%80) Acanthamoeba cinsi amibin varlığı saptandı. İzole ettiğimiz amipler oda sıcaklığında (15-18° C), 24° C, 37° C ve 40° C de ürediler fakat Acanthamoeba türlerinin en hızlı ve yoğun olarak 24° C'de, Naegleria türü ise aynı şekilde 37° C'de ürediği saptandı. Çalışmamızda amiplerin boyanmasında Heidenhain'ın demirli hematoksilen boyası (HDHB), Giemsa ve trikrom boyalarını uyguladık. En iyi sonucu HDHB ile aldık. Giemsa ve trikrom boyalarının uygulama süresi HDHB'ye kıyasla kısa olması bu boyalar yönünden bir avantaj olarak değerlendirildi. Araştırmamızda aksenik kültür ortamı olarak Neff in sıvı besiyerini kullandık. Bu besiyerinde Naegleria susunu üretemedik ama Acanthamoeba türleri ile iyi sonuç aldık. İzole ettiğimiz amipleri farelere intranasal yoldan vererek patojen etkilerini araştırdık. Fakat farelerde herhangi bir patojenite saptayamadık. 59

SUMMARY Studies On Isolation, Characterization And Pathogenicity of Free - Living Amoebae From Soil And Fresh - Water Specimens in Sivas In this study we have tried to isolate, characterize and determine their infectivity for mice from soil and fresh water specimens in Sivas. In isolation studies we used non-nutrirent agar plates seeded with Escherichia coli. Soil, mud or water specimens were placed in the center of plates as dry soil pieces or a pieces of mud or a drop water. Two plates were used for each specimen and one of each was incubated at 37° C and the other left at room temperature. Plates were examined daily without opening their lids and subcultures were made by transferring a small piece of culture medium with amoebae on it to a new plate. In axenic culture studies Neffs fluid medium was used. The genera of isolated amoebae were defined by the morphology of their trophozoites and cysts. The criteria for the identification of Naegleria sp. was the transformation of ameboid trophozoites to flagellated stage. For infectivity tests laboratory breed mice white were infected by intranasal instillation and they were observed for 30 days. From five of the seven specimens (70.1 % ) we have isolated one or two genera of free-living amoebae. One of these 5 isolates was identified as Naegleria sp. depending upon the presence of its two different trophozoit stages, one ameboid and the other flagelated form; and also Its typical cyst morphology. Two of the remaining four isolated were identofied as leptomyxid amebae depending upon its trophozoite cyst morphology. Unfortunately we have not succeeded in obtaining pure cultures of these two strains of heptomyxid amoebae since cultures were also contained Acanthamoeba spp. Four of the 5 isolates (80 %) were identified as Acanthamoeba spp. All the isolates were grew well at room temperatures (15-18° C), 24° C, 37° C and 40° C Among the stains (Heidenhain's iron haematoxylin, trichrome and Giemsa) which we have used in staining the amoebae the best results were obtained with the first one but the other two had the advantage of being simple and taking short time. We have easily obtained axenic cultures of Acanthamoeba spp. in Neffs fluid medium but not of Naegleria sp.. None of the isolated amoebae {Acanthamoeba spp. and Naegleria sp.) showed any infectivity for mice. bD