3-Metilkolantren ile indüklenip metil-di-t-bütilfenon ile promote edilen rat akciğer dokusunda p53 geni ekson-5

Abstract

VI-OZET Çevremizde sıkça karşılaştığımız kimyasal maddelerden olan 3-MC ve BHT'nin farklı dozlarının, iki aşamalı kimyasal karsinogenezisdeki rollerini ortaya koymak amacıyla, yeni doğmuş 52 adet erkek wistar rati üzerinde deney yapılmıştır. Araştırmaya dahil edilen deney grubu ratlar; sadece 3-MC uygulanan (15 rat-Dl), 3-MC'yi takiben BHT uygulanan (15 rat-D2), sadece BHT uygulanan (12 rat-D3) ve kontrol (10 rat-D4) olmak üzere 4 gruba ayrılmıştır. Çalışmada Dİ grubundaki 15 rata, 6 kez 3-MC 40mg/kg/hafta dozda i.p. yolla uygulanmıştır. D2 grubundaki 15 rata, tek doz 40mg/kg 3-MC ve ardından 6 kez BHT 200mg/kg/hafta dozda yine i.p. yoluyla uygulanmıştır. D3 grubundaki 12 rata, sadece 6 kez BHT 200mg/kg/hafta dozda uygulanmıştır. Kontrol (K) grubundaki 10 rata, sadece 3-MC ve BHT'nin çözülmesinde kullanılan mısır yağı 6 kez 100u! şeklinde uygulanmıştır. Bütün gruplar, enjeksiyondan sonra 26 hafta gözlenmiş ve deneklere servikal dislokasyon uygulanmadan önce radyoloji ve nükleer tıp değerlendirmeleri yapılmıştır. Daha sonra deneklerden alman akciğer örnekleri üzerinde, histopatolojik inceleme ve p53 ekson-5 mutasyon taraması yapılmıştır. Mutasyonları saptamak için önce akciğer örneklerinden DNA'lar izole edilmiş ve bu DNA'lar uygun primerler kullanılarak PCR tekniği ile çoğaltılmıştır. Sonra PCR ürünlerinde SSCP analizi yapılarak, agaroz jel elektroforezinde değerlendirilmiştir. Elde edilen sonuçlara göre; bu maddeler kullanılan bu dozlarda grupların hiçbirinde, akciğer tümörü oluşturmamıştır. Ancak, yüksek doz 3-MC uygulanan Dİ grubunda, enjeksiyon bölgesi yakınında malign karekterli sarkomalar (% 55.55) gelişmiştir. Yine bu grupta (Dİ), %1 1.1 1 oranında p53 ekson-5 mutasyonu saptanmıştır. D2 grubundaki akciğer örneklerinde yüksek oranda (% 42.85) p53 ekson-5 mutasyonları (kanserlerde çoğunlukla mutasyona uğradığı bilinen) tespit edilmiştir. D3 grubunda, kontrol grubunda olduğu gibi herhangi bir tümör bulgusuna veya mutasyona rastlanmamıştır. D2 grubunda yüksek oranda bulunan mutasyonlar, akciğer tümör gelişimi öncesinde meydana gelen mutasyonları destekler tarzda olduğu düşünülmüştür. 78

VH-SUMMARY In order to determine the roles of 3-MC and BHT, they both are very frequently available in the environment, on dual stage chemical carcinogenesis, an experiment is conducted on 52 new born male wistar rats. The rats in the experiments were divided into four groups. The first group, Dl, containing 15 rats was treated with only 3-MC. The second group D2, 15 rats, was treated with both 3-MC and BHT. The third group D3, with 12 rats, was treated only with BHT. At last is the control group C, having 10 rats. Group Dl was administered 3-MC i.p. 40 mg/kg of the body weight per week for 6 weeks. Group D2 was given a single dose of 3-MC i.p. 40 mg/kg of the body weight and subsequently BHT was given 200 mg/kg of the body weight per week for 6 weeks. Group D3 was exposed to only BHT 200 mg/kg of the body weight on weekly basis for 6 weeks. Control group C, was injected corn oil only in the amount of 100 ul. For 6 weeks, that 3-MC and BHT both are soluable in. AH of the groups were observed for 26 weeks following the injections, and radiographical and scintigraphical assessment were carried out, prior to cervical dislocation. The lung specimens from rats were histopathologically examined and p53 exon-5 mutations were investigated. In order to determine mutations, the first step DNAs were isolated from the lung specimens and these DNAs were amplified by PCR using primers specific for p53 exon-5. The PCR products were analyzed by SSCP methodology and were evaluated in agarose gel electrophoresis. As a result, there is no lung tumor observed among all of the groups in the experiment at given dosage. However, in group Dl, exposed to high dosage of 3- MC, malign sarcomas were observed around injection sites at 55.55% level. The p53 exon-5 mutations were observed among group Dl at 11.11% as well. In the lung specimens of group D2, high rate (42.85%) of p53 exon-5 mutations (which is common in most cancer cases) was observed. In group D3, as also in group C, there are no cases of lung cancer nor p53 exon-5 mutations. One can think that, mutations observed in group D2, are supporting the mutations occur prior to the development of lung tumors. 79