Yüzey adezinlerine spesifik ELISA ile Entamoeba histolytica`nın ayırıcı tanısı ve kültür koşullarının optimizasyonu

Abstract

Bu çalışmada; Aralık 2007- Kasım 2008 arasında, Sivas'da yaşayan ilköğretim çağındaki çocuklar arasında dışkıda antijen aranması yöntemiyle E.histolytica'nın apatojen E. dispar'dan ayırt edilerek gerçek prevelansının belirlenmesi ve parazitin kültür koşullarının optimize edilerek çoğaltılması amaçlanmıştır.Bu amaçla toplanan 1449 dışkı örneğinin, direkt inceleme ve Trikrome boyanması sonucu 22'sinde (%1,5) E. histolytica/dispar kistine rastlanmıştır. Ayrıca protozoon kisti saptanan dışkı örneklerinin (E. histolytica/dispar, E. coli, B. hominis, G. intestinalis, I. butschlii) 86'sında E. histolytica ELISA ile spesifik olarak patojen tür araştırılmış ve örneklerin hiç birinde E. histolytica'ya spesifik yüzey adezinlerine rastlanmamıştırE. histolytica/dispar kisti saptanan 20 örnek LE besiyerine alındığında birinde (%5) amip trofozoitine rastlanmış ancak alt kültürleri devam ettirilememiştir. Diğer taraftan patojen olduğu bilinen bir E. histolytica suşunun Robinson besiyerinde alt kültürleri yapılarak günümüze kadar başarıyla sürdürülmüştür. Bu suş ile yapılan kültür optimizasyonu çalışmalarında, standart bakteriyolojik etüvde 35,5 ºC'de 4 günde bir yapılan pasajlara paralel olarak parazitin %5 CO2'li etüvde, 37,5 ºC'de ve pH'sı 6.5, ve 7.5 olan besiyerlerindeki çoğalma durumu araştırılmıştır. pH belirtilen değerlere değiştirildiğinde pasajın 4. gününde besiyerinde canlı parazit kalmamıştır. %5 CO2'li etüv ile standart etüv arasında trofozoitlerin çoğalması açısından bir fark bulunmamıştır. Bunun yanısıra, 37.5 ºC'de trofozotilerin canlılığını koruduğu ancak üremesinin azaldığı gözlenmiştir.Anahtar kelimeler: Entamoeba histolytica, ELISA, Robinson besiyeri

The aim of this study is to estimate the true prevalence of E.histolytica by stool antigen detection method that distinguish E. histolytica from nonpathogenic E.dispar among primary school children living in Sivas between December 2007 and November 2008. Additionally, optimisation of culture conditions for parasite reproduction is the following aim.E. histolytica/dispar cyst form is detected 22 (1.5%) of 1449 collected stool samples by nativ-lugol examiantion and trichrom staining. Furthermore, 86 stool samples that contain protozoa cysts (E. histolytica/dispar, E. coli, B. hominis, G. intestinalis, I. butschlii) were tested for pathogenic strain by ELISA. All stool samples gave negative reaction reaction for E. histolytica surface adhesinsTwenty stool samples (containing E. histolytica/dispar) were inoculated in LE medium and E.histolytica trophozoites were detected in one (%5) culture but in subcultures we could not see trophozoites. On the other hand, a pathogenic E. histolytica strain was cultured in Robinson medium. The subcultures have been carried on succesfully until now. The passages of parasite were performed on fourth day in standart bacteriologic incubator at 35.5ºC. Parallel to these passages, E. histolytica was cultured at 37.5ºC, in %5 CO2 incubator at 35.5ºC , and in media which have a pH value 6.5 and 7.5. No living trophozoites was detected in pH changed media on fourth day after passage. %5 CO2 incubator and standart bacteriological incubator did not yield difference in terms of parasite reproduction. However, it is observed that at 37.5ºC trophozoites were able to survive but reproduction rate was decrased.Key words: Entamoeba histolytica, ELISA, Robinson medium