Pre- ve postimplantasyon dönemlerinde fare endometriumunda rhokinaz A`nın immünolokalizasyonu

Abstract

Memelilerde implantasyon, birçok sinyal moleküllerinin blastosist ile reseptiv endometrium arasındaki haberleşmede rol aldığı karmaşık biyolojik olaylardan biridir. Rho proteinleri, sitoiskelet ve hücre büyümesinin yanı sıra hücre hareketi, hücre-hücre adezyonu, göçü, çoğalması, apoptozu ve invazyonu gibi çok çeşitli hücresel işlevlerin gerçekleşmesinde rol oynarlar. Hücresel kontrolün çoklu süreçlerindeki rolleri ile kabul edilmesi, Rho proteinlerinin tümör büyümesi - ilerlemesi, metastaz ve yakın zamanda da anjiogenezde etkili olduğunu göstermiştir.Bu çalışmada, fare endometriumunda implantasyon öncesi ve implantasyon döneminde Rhokinaz protein ailesinden RhoA proteininin immünolokalizasyonunun belirlenerek olası rollerini araştırmak amaçlanmıştır.Bu amaçla, vücut ağırlıkları 20-40 gram arasında değişen Mus musculus cinsi 40 adet erişkin fare kullanıldı. Normal diyetle beslenen farelere, oda ısısında, 12 saat aydınlık- 12 saat karanlık periyotlar oluşturularak östrus evresine girmeleri sağlandı. Östrus siklusları vajinal smear ile belirlendi. Vajinal tıkaç oluşumuna bakılarak gebelikler tespit edildi. Metestrus, estrus, proestrus ve diestrus evrelerinin her biri için 5'er fare ile gebeliğin 5., 7., 9. ve 11. günleri için 5'er gebe fare kullanıldı. Farelere deney sonunda 200mg/kg pentotal sodyum intraperitoneal yolla uygulanarak ötenazi yapıldı. Ölüm sonrası alınan uterus dokularında ışık mikroskobik, immunohistokimyasal ve immunofloresans incelemeler için rutin takip protokolleri uygulandı. Işık mikroskobik incelemeler için parafine gömülen örneklere genel morfolojiyi göstermek amacıyla hematoksilen-eozin, spesifik molekülleri göstermek için ise immunohistokimyasal ve immunofloresans teknikler uygulandı. Işık ve floresans mikroskobik değerlendirme için alınan kesitler Olympus BX51 mikroskopta değerlendirilip, uygun alanlardan fotoğraf çekildi.Preimplantasyon sürecinin her evresinde luminal epitel, bez epiteli ve endotelde kuvvetli RhoA ekspresyonu izlenmiştir. Postimplantasyon döneminin 5. ve 7. gününde lümen epitelinde RhoA'nın diğer alanlara göre daha kuvvetli eksprese olduğu görülmüştür. 11.günde en fazla RhoA ekspresyonu spongiöz desiduada izlenmiştir. Bu alanda görülen RhoA ekspresyonu 9.günde RhoA ekspresyonunun en fazla görüldüğü alan olan labirent desiduaya göre daha kuvvetli olduğu görülmüştür.Sonuç olarak, Rho'nun luminal epitel, bez epiteli ve desiduada kuvvetli ekspresyon göstermesi, desidua ve endometriumda koruyucu, onarıcı ve yara iyileştirici etkilerinin olabileceğini düşündürmektedir.Anahtar sözcükler: Rhokinaz, RhoA, implantasyon, fare

Implantation in mammals is a complex biological process that involves an crosstalking between blastocyst and receptive endometrium controlled by different signal molecules. Rho proteins are involved in the regulation of many cellular processes, including cytoskeletal organization, cell motility, cell cycle progression and growth, apoptosis, gene transcription and vesicle transport. Consequently, it is not surprising that Rho proteins are involved in different steps of tumor development and progression as well as metastasis and recently angiogenesis.In this study, the potential roles of RhoA proteins will be investigated using their ımmünolocalization in the mouse endometrium during pre-and postnatal periods.To do this, 40 Mus musculus mice, weighing 20-40 g were used in the present study. Animal were kept at room temperature and 14 hours light, 10 hours dark periods and were fed with normal diet in order to get them to estius cycle. Their estius cycles were determined by vaginal smear. Their pregnancies were designated by vaginal plug. Metestrus, estrus, proestrus and diestrus phase groups consisted of 5 mice for each group. Similarly 5 th, 7 th, 9 th and 11 th days of pregnancy groups consisted of 5 mice for each group. At the end of experiments, euthanasia was carried out by injection of 200 mg/kg penthatol sodium intraperitonally. Uterinal tissues were obtained and processed for light microscopical, immunohistochemical and immunoflourescence invastigations. Parafin tissue sections were used for either haemoxylene-eosin staining to show general morphology or immunohistochemical and immunoflourescence techniques to show the rhokinase A expression in uterinal tissues. Field of views were photographed using an Olympus BX51 microscope.Findings of the present study revealed that expressions of Rho every preimplantation groups were strong at luminal and glandular epithelium and capillary endothelium. 5 th, 7 th days of pregnancy groups expressions of Rho at luminal epithelium were stronger than seen in other sites. 11 th days of pregnancy expressions of Rho were stronger at spongious decidua than seen in labyrinth decidua at 9 th days of pregnancy group.As a result, the showing strong expression of RhoA on the luminal and gland epithelials and the decidua suggests that RhoA may have the protective and repairing effects and the effect of the improvement of the wound on the decidua and the endometrium.Key words: Rhokinase, Rho A, implantation, mouse