Pre- ve postimplantasyon dönemlerinde fare endometriumundaki notch ligand Jagged-1 ve Jagged-2 `nin immünolokalizasyonu

Abstract

Memelilerde implantasyon, birçok sinyal molekülünün blastosist ile reseptiv endometrium arasındaki haberleşmede rol aldığı karmaşık biyolojik olaylardan biridir. Notch sinyal yolağı ve Notch ligandları Jagged1 ve Jagged2, hücre proliferasyonu, hareketi, hücre-hücre adezyonu, göçü, apoptozu ve invazyonu gibi çok çeşitli hücresel fonksiyonların gerçekleşmesinde rol oynarlar. Hücresel kontrolün çoklu hücre süreçlerindeki rolleri ile kabul edilmesi, Jagged moleküllerinin tümör büyümesi, ilerlemesi, metastaz ve anjiyogenezde etkili olduğunu göstermiştir.Bu çalışmada, fare endometriumunda implantasyon öncesi ve implantasyon döneminde Notch ligand Jag1 ve Jag2'nin immünolokalizasyonlarının belirlenerek olası rollerinin araştırılması amaçlanmıştır.Bu amaçla vücut ağırlıkları 20?40 gram arasında değişen Mus musculus cinsi 40 adet erişkin fare kullanıldı. Normal diyetle beslenen farelere, oda ısısında, 12 saat aydınlık 12 saat karanlık periyotlar oluşturularak östrus evresine girmeleri sağlandı. Östrus siklusları vajinal smear ile belirlendi. Vajinal tıkaç oluşumuna bakılarak gebelikler tespit edildi. Metöstrus, östrus, proöstrus ve diöstrus evrelerinin herbiri için 5'er fare ile gebeliğin 5., 7., 9. Ve 11. günleri için 5'er tane gebe fare kullanıldı. Farelere deney sonunda 200mg/kg sodyum penta-barbital intraperitoneal yoldan verilerek ötenazi uygulandı ve uterus dokuları incelenmek üzere alındı. Uterus dokularına ışık mikroskopik ve immunofloresans incelemeler için rutin takip protokolleri ugulandı. Işık mikroskopik incelemeler için parafine gömülen örneklere morfolojiyi göstermek amacıyla hematoksilen-eozin, spesifik molekülleri göstermek için ise immunofloresans teknikler uygulandı. Işık ve floresans mikroskopik değerlendirme için alınan kesitler Olympus marka floresans mikroskopta değerlendirilip, uygun alanlardan görüntüler elde edildi.

Implantation in mammals is a complex biological process that involves an crosstalking between balastocyst and receptive endometrium controlled by different signal molecules. Notch signalling and Notch ligand Jagged1 and Jagged2 are involved in the regulation of many cellular processesi including cytoskeletal organization, cell motility, cell cycle progression and growth, apoptosis, gene transcription. Consequently, it is not suprising that Jagged1 and Jagged2 molecules are involved in different steps of tumor development and progression as well as metastasis and angiogenesis.In the present study, the potential roles of Jagged molecules were investigated using their immunolocalization in the mouse endometrium during pre-and postnatal periods.To do this, 40 Mus musculus mice, weighing 20?40 g were used in the present study. Animals were kept at room temperature and at 12 hours light, 12 hours dark periods and were fed with normal diet in order to get them to estrous cycle. Their estrous cycles were determined by vaginal smear. Their pregnancies were designated by the presence vaginal plug. Metestrus, estrus, proestrus, and diestrus phase groups consisted of 5 mice for each group. Similarly, 5th, 7th, 9th, and 11 th days of pregnancy groups consisted of 5 mice for each group. At the end of experiments, euthanasia was carried out by the injection of 200 mg/kg penthotal sodium intraperitoneally. Uterinal tissues were obtained and processed for light microscopical and immunoflourescence investigetions. Paraffin tissue sections were used for either hemotoxylene-eosin staining to show general morphology and immunoflourescence techniques to show the Notch ligand Jagged1 and Jagged2 expressions in uterinal tissues. Field of views were photographed using an Olympus microscope.