Kronik myelositer lösemili hastaların sitogenetik analizi ve RT-PCR tekniği ile bcr-abl gen diziliminin teşhisi

Abstract

Kronik miyelositer lösemili hastaların %90'nında Philadelphia kromozomu bulunmaktadır. Philadelphia kromozomu 9 ve 22 numaralı kromozomlar arasındaki translokasyon ile meydana gelir. Bu translokasyon sonucunda bcr-abl füzyon geni meydana gelir (4). Bu çalışmanın amacı 25 KML hastasında bcr-abl hibrit geninin varlığının RT- PCR yöntemi ile gösterilmesi ve Ph kromozomun sitogenetik açıdan değerlendirilerek arasındaki korelasyonu belirlemektir. Olgularımızda bcr-abl geninin pozitif bulunma oranı %80 olarak saptanmıştır. Ph kromozomun pozitif bulunma oranı %80 olarak bulunmuştur. K562 hücre hattı pozitif kontrol olarak, distile su ise negatif kontrol olarak kullanılmıştır. Total RNA'ların pozitif kontrolü olarak ise B-actin primerleri kllanılmıştır. Toplam RNA'lar kan, kemik iliği ve hücre soylarından izole edilerek; mRNA'lardan cDNA'lar sentezlenmiş ve böylece hedef DNA'lar PCR yöntemi ile çoğaltılmıştır. 25 KML hastasının bcr-abl düzenlenmesinin tespiti için oligonükleotid primerler uygulanmıştır. PCR ürünü, agaroz jele yüklenerek mini jelde TBE tamponunda ayrılmış ve jel ethidium bromür ile boyanarak UV. ışığında görüntüleri elde edilmiştir. Sitogeneik analiz de ise kemik iliği materyalinden lenfosit kültürü yapılmış ve GTG boyama yapılarak mikroskobik incelemeleri yapılmıştır, bcr-abl hibrit geninin protein ürünlerinin hücre içi fonksiyonları ve hangi mekanizmaları kullanarak hücreleri transforme ettiğinin anlaşılabilmesi için daha ileri araştırmalara gerek duyulmaktadır. Elde edilen sonuçlara göre diğer yöntemlerden daha hızlı ve daha duyarlı olan PCR yönteminin malign hastalıkların tanısının konulması ve tedaviye verdiği cevabın izlenmesinde kullanılabileceği kanısındayız.

Ninety percent of Chronic myelocider leukemia cases have Philadelphia chromosome (Ph). Ph chromosome occurs with the translocation between 9th and 22 th chromosomes. BCR-ABL fusion gene occurs after this translocation (4). The aim of this study is to show bcr-abl hybrid gene existance with RT-PCR method in 25 CML cases and by estimating the Ph chromosome in cytogenetic way to determine the corelation betwen them. In our cases it's established to be found the ratio of bcr-abl gene positiveis 80% and the ratio of Ph chromosome positive is 80%. K562 cell line is used as positive control and pure water is used as negative controls of total RNA's.Total RNA's are isolated from blood, bone marrow and cell lineage; cDNA's synthesis from mRNA's so target DNA's are multiplied by PCR method. Oligonucleotide primers are applied to confrim of ordering bcr-abl in 25 CML cases. PCR product is performed in agorose gel. By dying the gel with ethidium bromide, screen is obtained under UV. light. In cytogenetic analysis lympocyte culture has been done from bone marrow material and by doing GTG dying microscope analysis has been done. It requires more further studies for understanding bcr-abl gene's intracellular functions of protein products and by using which mechanisms it transformes cells. As the results that we had, we understood that PCR method, which is more quick and more sensitive, could be used for diagnosing the malign illness and watching the response for the treatment.