Normal endometriyum, endometriyal hiperplazi ve endometriyum kanserlerinde EZH2 proteininin moleküler yöntemlerle değerlendirilmesi

Abstract

Amaç: Bu çalışmada, malignite açısından iki farklı insan endometriyum kanser hücre hatları ile normal endometriyum, endometriyal hiperplazi ve endometriyum kanserlerinde Enhancer of Zeste Homolog-2 (EZH2)'nin rolünün araştırılması amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: İnsan endometriyum kanseri hücre hatları Ishikawa ve MFE-319 (ACC-423) ile; normal endometriyum (proliferasyon ve sekresyon evresi); endometriyal hiperplazi (basit atipisiz ve kompleks atipili) ve endometriyal adenokarsinom (Tip I ve Tip II) örneklerinde EZH2 proteininin indirek immunohistokimyasal ve Western blotting yöntemleri ile değerlendirilmesi yapılmıştır. TUNEL yöntemi ile % apoptotik indeksler belirlenmiştir. EZH2 proteininin immunoreaktivite boyanmaları hafif (1), orta (2), şiddetli (3) ve çok şiddetli (4) olarak belirlenmiştir. Boyanan hücre sayıları % olarak sayılıp, boyanma şiddetleri ile H–skor elde edilerek, sonuçlar One-way ANOVA istatistiksel testi ile karşılaştırmalı olarak değerlendirilmiştir. P<0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edilmiştir. Bulgular: Çalışmada, malignite açısından farklı iki insan endometriyum kanser hücre hattı EZH2 immunoreaktivitesi açısından karşılaştırmalı olarak değerlendirildiğinde; agresif olan MFE-319 insan endometriyum hücre hattında çok şiddetli (4) gözlenirken, Ishikawa hücrelerinde hafif/orta (1/2) olarak izlenmiştir (p<0,05). Histopatolojik değerlendirmenin ardından endometriyum örneklerinde EZH2 immunoreaktivitesi değerlendirildiğinde, normal endometriyumdan hiperplaziye geçiş ve endometriyal hiperplaziden karsinogeneze geçiş süreçlerinde istatistiksel olarak anlamlı artmış EZH2 immunoreaktivitesi izlenmiştir. % TUNEL indeksleri değerlendirildiğinde kanser gelişiminin ileri evrelerinde TUNEL pozitif hücre sayılarında istatistiksel olarak anlamlı artış olduğu belirlenmiştir. Western Blotting yöntemi ile EZH2 proteini varlığı insan endometriyum kanser hücre hatlarında saptanmıştır. Sonuç: Malignite yönünden farklı iki farklı insan endometriyum kanser hattında ve normal endometriyumdan, endometriyal hiperplaziye ve karsinogenez sürecinde EZH2 proteininin prognostik faktör ve kanser tedavisinde hedef molekül olarak önemi ortaya konulmuştur.

Objective: The aim of this study, in terms of malignity, is to investigate the Enhancer of Zeste Homolog-2 (EZH2)'s role in two different human endometrium cancer cell lines and in the normal endometrium, endometrial hyperplasia and endometrium cancers.Material and methods: On the human endometrium cancer cell lines Ishikawa and MFE-319 (ACC-423); normal endometrium (proliferation and secretion stage); endometrial hyperplasia (basic non-atypia and complex atypia) and endometrial adenocarcinoma (Type I and Type II) samples, the evaluation of EZH2 protein was made with the indirect immunohistochemical and Western blotting methods. With the TUNEL method, the percentage of apoptotic indexes was evaluated. The immunoreactivity staining of the EZH2 protein was detected as light (1), medium (2), strong (3) and very strong (4). Stained cell numbers were counted as percent rate, with the staining intensity, the H-score was obtained, and then the results were evaluated by using the One-way ANOVA statistical test in a comparative manner. P<0.05 was accepted as significant.Results: In this study, the two different human endometrial cell lines were evaluated comparatively with the EZH2 immunoreactivity in terms of malignity. The aggressive MFE319 human endometrium cell line was strongly (4) stained, meanwhile the Ishikawa cells were stained as light/medium (1/2) degrees (p<0.05). After the histopathologic evaluation, when the EZH2 immunoreactivity was evaluated in the endometrium samples, at the transition at normal endometrium to hyperplasia and at the transition of endometrial hyperplasia to carcinogenesis process; statistically increased EZH2 immunoreactivity was observed. When the percent of TUNEL indexes were evaluated, at the later stage of cancer progression, TUNEL positive cell numbers increased in a statistically significant manner. With the Western Blotting method, EZH2 protein presence was detected at the human cell lines.Conclusion: In the two different human endometrium cancer cell lines that differ in the way of malignity and from the normal endometrium to endometrial hyperplasia to the carcinogenesis process; the significance of the EZH2 protein was revealed as a prognostic factor and as a target molecule in cancer treatment.