Deneysel inmemiş testis oluşturulmuş sıçanlarda oluşan testis hasarına yağ doku kaynaklı kök hücrelerinin etkileri

Abstract

Amaç: İnmemiş testis (İT) klinikte sık karşılaşılan bir durum olup genellikle fark edilemediğinden dolayı geç müdahale edilen bir hastalık durumudur. Geç kalınan durumlarda yüksek ısıya maruz kalan testislerde hasar oluşmakta ve bu da kısırlıkla sonuçlanabilmektedir. Kısırlık dışında sonradan inen veya indirilen testislerde tümör oluşma riski daha fazla olmaktadır. Kök hücrelerin hem testiküler hasar hem de tümör gelişiminde önleyici, koruyucu ve tedavi edici etkileri değişik çalışmalarla incelenmeye başlamış ama en önemli özellik olarak hangi amaçla kullanılırlarsa kullanılsınlar zarar vermedikleri gözlenmektedir. Bu insan çalışmalarının başlamasına ve faz çalışmalarının daha korkusuzca yapılmasına izin vermiştir. Bu verile ışığında Deneysel İnmemiş Testis (DİT) hasarında Yağ Doku Kaynaklı Hücre (YDKH) uygulaması yapılarak gelişen hasara önleyici, koruyucu ve tedavi edici etkileri açısından incelenmeleri düşünüldü. Yağ dokusu kaynaklı kök hücrelerin testisteki davranışlarının araştırılması, testis işlevinin ve fertilitenin daha iyi anlaşılmasına ve büyük oranda kısırlık ve kanser gibi hastalıkların nedenlerinin ve gelecekteki yeni tedavi yaklaşımlarının oluşmasına büyük katkı sağlayacaktır. Bu çalışmada, sıçan testislerinde cerrahi yöntemle oluşturulmuş DİT hasarına karşı YDKH iyileştirici etkilerinin araştırılması ve testis dışı kök hücrelerin testis dokusu içindeki davranışlarının tanımlanması amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: Çalışmada 40 adet, ağırlıkları 45±9g arasında değişen 16-19 günlük testisleri henüz skrotuma inmemiş Wistar yavru erkek sıçanlar kullanıldı. Her grupta 20 hayvan olacak şekilde sıçanlar 3 gün beklemeli ve 7 gün beklemeli olarak 2 gruba ayrıldı. Her grup bir kontrol, bir tek taraflı DİT, bir DİT+BY ve bir DİT+YDKH olmak üzere 4 alt grupa ayrıldı. Kontrol grubuna hiçbir işlem yapılmadı. DİT grubunda İT karın içerisine dikilerek sabitlendi. Sham grubu olarak kullanılan BY grubuna 300 µl hücrelerin besiyeri verildi. YDKH uygulanan gruplara operayon sırasında bir kez 1x106 YDKH 300 µl besiyeri içinde rete testis içerisinden enjekte edildi. Eşit miktarda hücre kültür besiyeri enjekte edildi. Deney sonrası hayvanların testisleri toplanarak ağırlıkları ölçüldü. Histopatolojik değerlendirmeler ve oksidatif stres açısından eNOS, iNOS antikorları; spermatogenetik seri hücre belirteçleri açısından VASA antikoru; apoptoz açısından TUNEL boyamaları yapılarak immünohistokimyasal değerlendirmeleri yapıldı. İstatistiksel analizler için ANOVA testi yapıldı. Bulgular: DİT yapılan testislerde seminifer tübüller arasında ödem ve boşluk, seminifer tübül içerisinde dejenerasyon, vakuolizasyon ve piknotik hücreler gözlenerek atrofik yapı bulundu. BY ile az miktarda YDKH ile belirgin bir şekilde oluşan histopatolojik değişikliklerin gerilediği saptandı. Hasarın oluşumunda oksidatif stresin yer aldığı NOS immünohistokimyası ile serbest rtadikallere bağlı apoptotik ölümün varlığı TUNEL işaretlemesi ile gösterildi. Spermatogonyal hücre belirteci olarak kullanılan VASA boyamalarında erken dönemde pozitifliğin yüksek olduğu ve en fazla kontrolde görüldüğü geç dönemde ise azaldığı ve özellikle DİT grubunda fazla bulundu. HE sonuçlarına benzer şekilde BY ile az miktarda görülen olumlu değişiklikler YDKH ile belirgin ve anlamlı bir şekilde arttı. Sonuç ve Yorum: DİT infertilite açısından önemli bir problem olup tedavisinde etkinliği artıracak yöntemlere ihtiyaç duyulmaktadır. KH potansiyeli her geçen gün artan ve DİT tedavisinde kullanım potansiyeli olan önemli bir üründür. Bu çalışmada bu ürünün oldukça etkin yararları saptanmış ve daha önemlisi olabilecek hiçbir zarar bulunmamıştır. Testise vermiş olduğu olumlu katkılar infertilite ve Üremeye Yardımcı Tedavi Yöntemleri açısından önemli olabilecek değerli bulgulardır. Kaliteli bir üretkenliğin sağlanmasında kök hücresel tedavinin çok değerli olabileceğini düşündürmektedir.

Aim: Undescended testes is common clinical condition and it is started being treated late because generally not realised. In delayed situations testicles are damaged by the higher temperatures and can lead to infertility. Besides infertility, there is a higher risk of tumor formation in belated dropping or surgical dropping. In various studies, stem cells were found to be protective, curative in testicular damage and preventive in tumor formation, moreover, independent from what aim they are used, they were found to be unharmful. This lead to start human experiments and phase studies to be done more fearlessly. In the light of these data, Adipocyte derived stem cell (ADSC) treatment were thought to be investigated in the way of protective and curative effects in experimental undescended testes (EUT) damage. The behaviours of the adipocyte derived stem cells in testicles will be beneficial to understand the reasons of mostly infertility and cancer, and the testicular functions and fertility and new treatment approaches in the future. In this study, it was aimed to investigate the curative effects of ADSC of surgical EC damage and to define the behaviours of the non-testicular stem cells in the testicle tissue.Materials and Methods: In this study 40 Wistar male rats, which weight 45±9g, 16-19 days old and those who their testicles did not drop to scrotum, were used. Rats were seperated in two groups that 3 days waiting and 7 days waiting with 20 animals in each. In every group, there were 1 control, 1 single EUT, 1 EUT + medium, 1 EUT + ADSC. In control animals no application was done. In EC animals, testicle was stitched intraabdominally. In medium animals which were used as SHAM group, 300 µl broth of the cell culture was injected. In ADSC treated animals, one set of 1x106 ADSC in 300 µl broth was injected in rete testis. After the experiment, testicles from the animals were collected and weighted. eNOS and iNOS antibodies for histopathological evaluation, VASA antibody for spermatogetic serial cell marker, TUNEL staining for apoptosis were done. For statistical analysis ANOVA test was applied.Results: In EUT applied testicles, eudemma and space in between seminifer tubules, degeneration inside seminifer tubule, vacoulasation and picnotic cells and atrophic structures were observed. There were retreat in explicit histopathologic differences via medium and low amount of ADSC. With NOS immunohistochemistry the oxidative damage, with TUNEL the apoptotic death were shown. VASA staining that were used as spermatogonial cell marker were found to be high in positivity in early term, highest in control and decreased in early term, especially high in EUT group. Similarly in HE results, little positive changes with broth were found to be significant and increased in ADSC samples.Conclusion: Undescended testes is an important problem of infertility and there are needs for methods to improve curability. Stem cells are substantial product for EUT treatment with everyday increasing potential. In this study pretty efficient benefits of this product were detected and moreover no adverse effect was found. The positive contributions they gave to the testicles might be valuable findings in fields of infertility and assisted reproductive techniques. It is thought that stem cells based therapy is valuable to sustain a quality reproductivity.