Folikül sıvısı, kan ve kümülüs hücrelerinde bulunan miRNA`lar ve ilişkili proteinlerin oosit kalitesi ile gebelik gerçekleşmesi üzerine etkisi

Abstract

Amaç: Bu çalışmada açıklanamayan infertil kadınların IVF tedavisi sonrası gebe kalan ve kalmayan kan, folikül sıvısı ve kümülüs hücrelerinde RT-PCR ve immunfloresan teknikle incelenerek gebeliğin gerçekleşmesinde olan etkilerinin ve gebeliğin önceden belirlenmesinde kullanılabilirliğinin incelenmesi amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: Çalışmaya Ege Doğum Evi ve Kadın Hastalıkları Eğitim Araştırma Hastanesi Üremeye Yardımcı Tedavi Merkezi'ne gebelik istemi ile başvuran 20 açıklanamayan infertil hasta dahil edilmiştir. Çalışma grubu, β hCG konsantrasyon seviyelerine gebe ve gebe olmayan şeklinde iki gruba ayrılmıştır. OPU günü ve embriyo transferinden (ET) 11-12 gün sonra alınan periferik kanların serumları ve foliküler sıvıdan RNA izolasyonu yapıldı ve RT-PCR ile miRNA ekspersyon analizi gerçekleştirildi. Kümülüs hücreleri immünfloresans boyama protokolü uygulandı, H-skor veri değerleri `Independent T-test`ile incelendi.Bulgular: Kümülüs hücrelerinin immunfloresan incelemesinde GJA1, PTX3 ve BDNF immünreaktivitesinin gebe kalanlarda, IGFIIR ise gebe kalamayan hastalarada istatiksel olarak anlamlı artış gösterdiği tespit edildi. PCR analizinde, endojen miRNA (miR-320)'ya göre karşılaştırıldığında 13 miRNA (miR-378, miR-224, miR-212, miR-205, miR-191, miR-186, miR-181, miR-155, miR-146, miR-103, miR-23, let-7 ve RNU6B)'dan 10 tanesi ifade gösterirken; üç tanesinin (miR-146, miR-181, miR-212) hiç grupta ekspresyon göstermediği gözlendi.Sonuç ve Yorum: Bu çalışma kapsamında immünofloresan inceleme ile OPU sırasında alınan kümülüs hücrelerinde, gebe kalanlarda GJA1, PTX3 ve BDNF immünoreaktivitesinin yüksek, IGFIIR immünorektivitesinin ise düşük olması, bu moleküllerin gebeliğin gerçekleşmesinde etkili olduğunu göstermektedir. RT-PCR çalışmasında miR-212, miR-181 ve miR-146a ekspresyonlarının gözlenmesi nedeni ile gebelik üzerine etkilerinin olmadığı, buna karşılık; miR-378, miR-320, miR-224, miR-186, miR-155, miR-103, miR-23a ve Let -7a ekspresyonlarında gruplar arasında anlamlı farklılar olması nedeni ile gebeliğin önceden tahmin edilebilmesinde kullanılabileceği sonucuna varıldı.

Aim: In this study, after IVF treatment, the blood, follicle fluid and cumulus cells samples were studied from pregnant and non-pregnant unexplained infertile women using RT-PCR quantitative and immunofluoresan tecniques to predictive the pregnacy.Materials and Methods: The study included 20 unexplained infertility patients at Aegean Obstetrics and Gynecology Training and Research Hospital Assisted Reproduction Treatment Center, The working group was divided into pregnant and non-pregnant groups, At OPU day and 11-12 days after ET, solated blood serum and follicular fluid pools were analyzed by RT-PCR seru . The cumulus cells fixed stained with immunofluorescence tecnique and H-score data were evaluated with `Independent T-test`.Results: High GJA1, PTX3 and BDNF immunoreactivity in cumulus cells of pregnant women and high IGFIIR immunoreactivity in non-pregnant patients detecteted. RT-PCR analys compared with endogenous miRNA (miR-320), 10 of 13 miRNAs (miR-378, miR-224, miR-212, miR-205, miR-191, miR-186, miR-181, miR-155, miR-146, miR-103, miR-23, let-7a and RNU6B) were expressed; three (miR-146, miR-181, miR-212) of them did not express in any group.Conclusion: Consequently, the results of this study shows that, immunofluorescence analysis showed that GJA1, PTX3 and BDNF immunoreactivity were higher and IGFIIR immunoreactivity was lower in pregnant women in the cumulus cells taken during OPU, these molecules are effective in determining the quality and maturation of oocytes in the realization of gestation, in the RT-PCR study, the expression of miR-212, miR-181 and miR-146a was observed and the effects on pregnancy were not observed, whereas in the expressions of miR-320, miR23a, miR-224, miR-155, miR-103, Let-7, miR-186 and miR-378 significant differences between the groups can be predicted.