Çift zincir DNA kırığı olan spermler ile elde edilen embriyolardaki hasarın, oosit DNA tamir mekanizmaları ile düzeltilmesinde ghrelin`in rolü

Abstract

Amaç: Çift zincir DNA kırığı olan erkek fareler ile normal dişi farelerin çiftleşmesi sonucu elde edilecek hasarlı embriyoların ghrelin ile muamelesi DNA kırığı iyileşmesinin immunohistokimyasal teknik kullanılarak incelenmesi amaçlanmaktadır.Gereç ve Yöntem: Çalışmamız adolesan dönemdeki erkek fareler (n: 10) ve dişi fareler (n: 20) kullanıldı. Deney grubuna ait erkek farelere, 4 hafta boyunca, haftada 6 kere 6mg/kg siklofosfamid uygulanarak DNA hasarı oluşturuldu. Kontrol grubunu oluşturacak farelere ise ilaç uygulanmadı. Her iki gruba ait erkek fareler, sağlıklı genç dişi fareler ile bir gece çiftleşmeye bırakıldı. Ertesi sabah dişilerden vajinal smear alınacak ve pozitif olanlardan 1. günde sakrifiye edilerek tuba uterinalarından fertilize ooositler toplandı. Sağlıklı sperm ve sağlıklı oositlerden elde edilen embriyoların kültür mediumunda takip edileceği kontrol grubu, normal spermlerin ve normal ositlerden elde edilen embriyoların ghrelin ilave edilmiş kültür medimunda izlendiği sham grubu, çift zincir hasarlı sperm ve sağlıklı oositlerden elde edilen embriyoların normal embriyo kültür mediumunda takip edileceği deney grubu ve çift zincir hasarlı spermlerin ve normal ositlerden elde edilen embriyoların ghrelin ilave edilmiş kültür medimunda izlendiği deney grubu . Sperm DNA kırığ jel eletroforez yöntemi ile gösterildi. Bulgular: Sperm DNA'ları %90 saflıkta elde edildi. Jel elektrorez bulgularındaki sürüntünün uzunluğu DNA kırığının oluştuğunu gösterdi. Kontrol grubunda herhangi bir sürüntü görülmedi. Markerın yarısına kadar deney grubu sürtünmesi sürmesi DNA 'nın çift iplik kırığının oluştuğunu ve gamma HA2X pozitifliğini gösterdi.Sonuçlar: DNA çift iplik kığını siklofosmamid uygulaması ile modelledik. Sperm DNA saflığının bir sonucu olarakta çift iplik kırığını oluşturduk.Anahtar Sözcükler: Spermatogenez, DNA çift iplik kırığı, ghrelin, oosit

Aim: It is aimed to investigate the healing of ghrelin-treated DNA fragments of damaged embryos that will result in the mating of normal female mice with double-stranded DNA fragments using immunohistochemical techniques.Materials and Method: We used male mice (n: 10) and female mice (n: 20) in the adolescence period. Male rats of the experimental group were treated with 6 mg / kg cyclophosphamide 6 times per week for 4 weeks to generate DNA damage. The mice that will form the control group were not given any medication. Male rats of both groups were allowed to mate overnight with healthy young female mice. The next morning, the vaginal smears were removed from the teeth and fertilized oocytes were collected from tubal uterine by sacrifice on the first day. The experimental group in which embryos obtained from healthy sperm and healthy oocytes can be followed up in the culture medium, embryos obtained from normal sperm and normal oocytes in sham group, double-stranded sperm and healthy oocytes cultured in ghrelin-added culture medium can be followed in normal embryo culture medium and embryos obtained from double-chain damaged sperm and normal oocytes were observed in culture medium supplemented with ghrelin. Sperm DNA was labeled by shred gel electrophoresis.Results: Sperm DNA was obtained in 90% purity. The length of the operation in gel electroencephalograms showed that the DNA fragmentation occurred. No swabs were seen in the control group. Until the end of the marker, the experimental group rubbing followed the formation of a double strand of DNA and showed a positive HA2X gamma.Conclusion: DNA double-stranded was modeled by the application of cyclophosamid. As a result of the purity of the sperm DNA we created a double strand break.KeyWords: Spermatogenesis, DNA double strand break, ghrelin, oocyte.