Tavuk karaciğerinden katalaz enziminin saflaştırılması

Abstract

ÖZET Katalaz, kısmi indirgenmiş oksijen türleri ve H202 nin toksik etkisinden dokuların korunmasında önemli rol oynar. Tavuk karaciğer katalazı, NH4(S04)2 çöktürmesi, etanol- kloroform muamelesi, CM-Selüloz ve Sephadex G-200 kromatografisi kullanılarak saflaştırıldı. Jel fiitrasyon kromatografisi ile tavuk karaciğer katalazının molekül ağırlığı yaklaşık olarak 235000 Da bulundu. SDS-jel elektroforezi sonunda tavuk karaciğer katalazının molekül ağırlığı 57500 Da olarak bulundu ve 4 alt birimden oluştuğu tespit edildi. Spesifik aktivite 55765.5 U/mg olarak saptandı. Hem içeriğinin kabaca ölçülmesini sağlayan A407/A270 oranı 0.52 olarak bulundu. Enzimin Km değeri 100 mM olarak belirlendi. Enzimin 7.0-10.0 aralığında geniş bir pH optimumuna sahip olduğu görüldü. Tavuk karaciğer katalaz enziminin optimum sıcaklığı 25 °C olarak tespit edildi. Saflaştırılmış enzim aktivitesi KCN, NaN3, p-merkaptoetanol, DTT, iyodoasetamit tarafından inhibe edildi, fakat sodyum dietilditiyokarbomatın enzimi inhibe etmediği görüldü. vn

ABSTRACT Catalase plays a major role in the protection of tissues from toxic effects of H202 and partially reduced oxygen species. It was purified chicken liver by NH4(S04)2 precipitation, ethanol-chloroform treatment, CM-Cellülose, Sephadex G-200 chromatography. The molecular weight of the native chicken liver catalase was estimated by gel filtration to be approximately 235000 Da. SDS-gel electrophoresis results indicated that chicken liver catalase consists of for apparently identical subunits with a molecular weight of about 57500 Da. The specific activity was found to be 55765.3 U/mg. The optical spectrum of the purified enzyme shows a Soret bant at 407 nm characteristic of heme and there was apparent reduction by dithionite. The ratio A407/A270 the index of hematin content relative to protein, was 0.52. The Km was found to be 100 mM. The maximal activity of the enzyme was observed at between 7.0- 10.0. The enzyme has a optimum reaction temperature at 25 °C. The activity of purified catalase is inhibited by azide, cyanide, (3-mercaptoethanol, DTT and iodoacetamide but chicken liver catalase was not inhibited by sodium diethlydithiocarbamate. vra