Glutatyon-s-transferaz enziminin tavuk eritrositlerinden saflaştrılması ve karakterizasyonu

Abstract

ÖZET Glutatyon-s-transferaz elektrofilik ksenobiyotiklerin detoksifikasyonu ile ilgili bir enzim ailesidir. GSH-S transferaz p olarak tanımlanan enzim formu aseton çöktürmesi, etanol-kloroform ile muamele, DEAE-selüloz, Q-sefaroz ve Sefadex G-100 kromatografileri ile tavuk eritrositlerinden saflaştınldı. Tavuk eritrositlerinden saflaştırılan GST'nin moleküler ağırlığı jel flltrasyonu ile 47500 Da olarak bulundu. Tavuk eritrosit GST'nin alt birim molekül ağırlığı sodyum dodesilsülfat varlığında gerçekleştirilen elektroforez ile 24000 Da olarak saptandı. Spesifik aktivite değeri 20.39/mg olarak bulundu. CDNB için <m değeri Lineweaver-burk diyagramından 0.71 mM olarak hesaplandı. CDNB ile maksimum GST aktivitesi için optimum sıcaklık 28°C olarak bulundu. pH 7.5'de enzim için maksimal aktivite değeri gözlendi. Saflaştırılmış GST aktivitesi DDT, üre, CDNB, Triton X-100, DTNB tarafından inhibe edildiği saptandı. VII

ABSTRACT The glutathione-s-transferases are a family of multifunctional enzymes involved in the detoxification of electrophilic xenobioties primarily through conjugation to reduce glutathione. A form of the enyzme, designated GSH-S transferase p, was purified chicken erythrocyte by aceton precipitation, ethanol-chloroform treatment, DEAE-Celliilose, Q-Sepharose, Sephadex G-100 chromatography. The molecular weight of GST purified form chicken erythrocyte was estimated as 47500 Da by gel filtration. The subunit molecular weight of chicken erythrocyte GST as determined by electrophoresis in the presence of sodium dodecyl sulfate was predicted as 24000 Da. The specific activity was found to be 20.39 U/mg. The Km for CDNB calculated from Uneweaver-burk plot was 0.71 mM. Optimum temperatures for maximum GST activity was 28°C for CDNB. The maximal activity of the enzyme was observed at pH 7.5. the activity of purified GST is inhibited by DDT, ufea, CDNB, Triton X-100, DTNB. VIII