In vitro characterization of microRNAs specific to cancer stem cell in larynx cancer

Abstract

Baş-boyun bölgesinde en sık görülen ve en agresif olan kanser türü larenks kanseridir. Ancak uygun tanı ve tedavi uygulandığında, baş-boyun bölgesinin tedaviye en iyi yanıt veren tümör ve dünyada en sık tanı koyulan kanser türüdür. Erkeklerde görülme sıklığı kadınlara göre yaklaşık 10 kat fazladır.Bu tür kanserin gelişmesinde en önemli risk faktörleri sigara ve alkol kullanımıdır. Skuamoz hücreli karsinomlar, larenks kanserlerinin % 90-95'ini oluşturmaktadır.Tüm kanser türlerinde olduğu gibi, erken tanı yaşam kalitesini önemli ölçüde yükseltilmesine yardımcı olurken, sağkalım süresini olumlu yönde etkilemektedir. MikroRNA'lar (miRNA'lar) protein kodlamayan küçük, RNA molekülleridir. Gen ifadesinin düzenlenmesinde ve neredeyse hücresel tüm mekanizmalarda aktif olarak rol oynamaktadırlar. MiRNA'ların çalışma mekanizmalarının iyi anlaşılması son zamanlarda yapılan araştırmaların odak noktası olmuştur. miRNA'ların Skuamoz Hücreli Larenks Kanseri (SHLK) gibi birçok kanserin patogenezinde önemli rol oynadığı gösterilmiştir. Bu çalışmada, ilk olarak önceki mikroarray çalışmalarında belirlenmiş olan mikroRNA'lar arasından mir-26b, mir200c-3p, mir-203, mir363-3p, and mir-1825 'ın Trizol ile izolasyonları yapılmış ve cDNA sentezi ve ardından qRT-PCR esseyleri yapılmıştır. Transfeksiyona hazır hale gelen mikroRNA'lar için fonksiyonel analizlerde kullanılmak üzere larenks squamos hücre hattı olan Hep-2 hücreleri kullanılmıştır. Hep-2 hücrelerine mikroRNA'ların transfeksiyonu yapıldıktan sonra sırasıyla, proliferasyon, migrasyon ve invasyon, soft agar analizleri yapılmıştır. Başlangıçta anlamlılık ifade etmesi açısından 5 mikroRNA ile yola çıkılmış ancak yapılan analizlerin sonucunda, bunlardan gözle görülür şekilde mir-203 ve mir363-3p 'nin önemli rol oynadığı bulunmuştur. Sonuç olarak, mir-203 ve mir363-3p 'nin Hep-2 larenks kanseri hücreleri üzerinde tümor supresör özellikte davranarak, kanser hücrelerinin proliferasyon, migrasyon ve invasyon ve koloni oluşturma yeteneklerini ciddi oranda azalttığı belirlenmiştir. Tanı aşamasında bu miRNA'lardan yararlanabilineceği belirlenmiştir. Bundan sonra yapılacak diğer fonksiyonel çalışmalara da yardımcı olacağı düşünülmektedir.Anahtar Kelimeler: Larenks Kanseri, mikroRNA, miR-203, miR-363-3p, Hep-2

Larynx cancer isthe most common and most aggressive type of cancer in the head and neck region. However, when appropriate diagnosis and treatment is applied, the treatment of the head and neck region is the best responding tumor which is the most common cancer type in the world. The incidence in men is about 10 times higher than in women. The most important risk factors for the development of cancer are smoking and alcohol use. Squamous cell carcinomas constitute 90-95% of laryngeal carcinomas and early diagnosis helps increase the quality of life significantly, and affects the survival time positivelylike other cancer types. MicroRNAs (miRNAs) are small RNA molecules that do not encode proteins which are actively involved in the regulation of gene expression and in almost all cellular mechanisms. A good understanding of the working mechanisms of miRNAs has been the focus of recent research. These researches have showed that microRNAs to play an important role in the pathogenesis of many cancers such as Larynx Squamous Cell Carsinoma (LSCC) In this study, samples were first isolated from microRNAs which was already identified in previous microarray studies with mir-26b, mir200c-3p, mir-203, mir363-3p, and mir-1825 in Trizol. cDNA synthesis was followed by qRT-PCR assays. For the microRNAs ready for transfection, Hep-2 cells, the larynx squamos cell line, were used for functional analysis. After transfection of microRNAs into Hep-2 cells, proliferation, migration and invasion, soft agar analyzes were followed and performed respectively. Initially, 5 microRNAs were expressed in terms of significance. However, as a result of these analyzes mir-203 and mir3633p played an important role in these experiments. As a result of that mir-203 and mir363-3p act as tumor suppressor on Hep-2 laryngeal cancer cells, indicating that cancer cells seriously reduce their ability to proliferate, migrate and invade and colonize. It was determined that these miRNAs could be used during diagnosis. Further experiments and works need to be donefor better understanding of this cancer mechanism.Keywords: Larynx Cancer , microRNA, mir-203, mir363-3p, Hep-2