Antineoplastik bir ajan olan ATRA`nın OVCAR-3 hücreleri üzerine etkilerinin incelenmesi

Abstract

Jinekolojik kanser türleri arasında en sık rastlanan ovaryum kanseri, kadınlarda kanser nedenli ölüm oranında yüksek yüzdeye sahiptir. Konulan teşhis sayısı ve meydana gelen ölüm oranlarına bakıldığında gelecekte de ovaryum kanserinin jinekolojik kanserler içerisinde en öldürücü tümör çeşidi olarak yerini koruyacağı düşünülmektedir.Retinoidler vitamin A'nın doğal ve sentetik türevleri olan hidrofobik bileşenlerdir. Hücre farklılaşması, hücre çoğalması, homeostaz ve gelişim üzerinde etkin olarak rol almaktadırlar. Kanserli hücrelerde kontrolsüz hücre çoğalmasını inhibe etmekte, hücre farklılaşmasına neden olmakta ve hücrelerde apoptozu indüklemektedirler. ATRA (All-Trans Retinoik Asit) fizyolojik bir metabolittir. Nükleer reseptörlerine bağlanarak hedef genlerin ifadelerinde aktif olarak rol almaktadırlar. Retinoik asit türevleri hem in vivo da hem de yapılan hücre kültürü çalışmalarında ovaryum kanser hücrelerinde büyümeyi inhibe etmektedir.Bu tez çalışmasında retinol metaboliti olan ATRA'nın tek başına ve klasik kemoterapötikler olan karboplatin ve paklitaksel ile kombine kullanımının OVCAR-3 (insan ovaryum adenokarsinoma epitel hücre hattı) hücre hattı üzerine olan etkileri araştırılmıştır. Bu amaçla sitotoksik etki belirlenmesinde MTT (3-(4,5 dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) yöntemi, apoptozun değerlendirilmesinde kaspaz-3 enzim aktivitesi ve DAPI (4-6 diamidino- phenylindole) boyama uygulanmıştır. VEGF, COX-2, IRS-1 ve Ki-67 genlerinin gen anlatım düzeylerindeki değişiklikler gerçek zamanlı kantitatif polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) tekniği uygulanarak belirlenmiştir.ATRA'nın tek başına doza ve zamana bağlı olarak OVCAR-3 hücre hattında sitotoksik etki gösterdiği, apoptozu indüklediği, IRS-1 ve COX-2 genlerinin gen anlatım seviyelerinde azalmaya neden olduğu saptanmıştır. Karboplatin ve paklitaksel ile ikili ve üçlü kombinasyonlar halinde OVCAR-3 hücre hattına uygulanan ATRA'nın tek başına uygulamaya göre kombinasyon olarak daha kısa sürede hücreler üzerinde etki gösterdiği saptanmıştır.Anahtar Kelimeler: Antineoplastik, ATRA, MTT, DAPI, Kaspaz-3, RT-PCR.

Ovarian cancer which is the most common types of gynecological cancer has a high percentage at the rate of death due to cancer in women. Depending on the number of diagnosis and rates of death, it is thought that ovarian cancer continues to be the most lethal gynecological malignancy.Retinoids, which are natural and synthetic vitamin A derivatives, are the hydrophobic components. They play an active role in cell differentiation, cell proliferation, homeostasis, and development. They inhibit the uncontrolled cellular proliferation in cancer cells, lead to cell differentiation and induce apoptosis in cells. ATRA (All-Trans Retinoic Acid) is a physiological metabolite. They play an active role in expression of target genes by binding to nuclear receptors. Retinoic acid derivatives inhibit the growth of ovarian cancer cells both in vivo and cell culture studies.In this thesis, it is studied the effects of the metabolite of retinol ATRA alone and in combination with conventional chemotherapeutics which are carboplatin and paclitaxel on OVCAR-3 (human ovarian epithelial adenocarcinoma cell line) cell line. For this purpose, MTT (3-(4,5 dimethylthiazol-2yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) method for determination of cytotoxic effects, caspase-3 enzyme activity and DAPI (4-6 diamidino-phenylindole) dying for the assessment of apoptosis were applied. Changes in gene expression levels of VEGF, COX-2, IRS-1 and Ki-67 genes has determined with applying real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR) technique.Depending on the dose and time, applying ATRA alone causes cytotoxic effects, inducing apoptosis, decreased gene expression levels of IRS-1 and COX-2 genes in OVCAR-3 cell line. Applying carboplatin and paclitaxel in double and triple combination with ATRA in OVCAR-3 cell line effects on the cells in a shorter time with respect to the application ATRA alone.Keywords: Antineoplastic, ATRA, MTT, DAPI, Caspase-3, RT-PCR.