Fruktoz, trehaloz ve sükroz içeren tris bazlı sulandırıcıya kolesterol yüklü siklodekstrin (CLC) ilavesinin koç spermasının dondurulabilirlik ve çözüm sonu spermatolojik parametreler üzerine etkilerinin araştırılması

Abstract

Bu çalÕúmanÕn amacÕ koç spermasÕQÕn dondurulmasÕ sÕrasÕnda ortaya çÕ kan ve tohumlamalardan sonra gebelik oranlar ÕQÕn önemli ölçüde düúmesine yol açan spermatozoon membran hasarlarÕQÕn minimize edilmesi amacÕyla Fruktoz, Trehaloz ve Sükroz içeren sulandÕUÕFÕya kolesterol ilavesinin dondurma sÕrasÕndaki koruyucu etkisi ve çözüm sonu spermatolojik parametreler üzerine etkinli÷inin araúWÕUÕlmasÕGÕr. ÇalÕú mada toplam 5 baúKÕYÕrcÕk Õ rkÕ koç ve bu koçlardan elektro-ejakulatör kullanÕlarak toplanan ejakülatlar kullanÕldÕ. AlÕnan sperma örnekleri motilite ve anormal spermatozoon oranlarÕ yönünden muayene edildi. Toplanan ejekülat spermatozoon yo÷unluklarÕ hemositometrik yöntemle belirlendi, ejekülatlar biri CLC içermeyen grup di÷eri de CLC (120x106spermatozoon /3mg) içeren grup olmak üzere 2 eúit kÕ sma ayrÕldÕ. 35oC de 15 dk ønkübasyondan sonra CLC içeren ve CLC içermeyen gruplarÕ her ikisi de 3 alt gruba ayrÕldÕ . Bu alt gruplar fruktoz, sükroz ve trehaloz solüsyonlar Õyla sulandÕUÕldÕ ve payetlere çekildi. Payetler equlibrasyon iúlemi için beklemeye bÕ rak ÕldÕ . Equlibrasyon iúleminden sonra payetler sÕYÕ azot buharÕnda dondurularak sÕYÕ azotun içinde saklandÕ . Çözülen payetlerden spermatozoa motilitesi, ölü-canlÕ ve anormal spermatozoon oranlarÕ , spermatozoon membran bütünlü÷ünü ve prematüre akrozom reaksiyonuna giren spermatozoon oranlarÕQÕn belirlenmesi amacÕyla örnekler alÕndÕ . YapÕlan çözüm sonu muayeneler sonucunda motilite açÕVÕndan úeker gruplarÕ arasÕnda istatiksel bir farklÕOÕk görülmezken en iyi sonuçlar CLC içeren CLC-trehaloz (%54.5±3.28) ve CLC-fruktoz (%54±2.86) gruplarÕnda elde edildi. CanlÕ spermatozoon oranlarÕnda ise CLC içeren fruktoz ve sükroz grubunun CLC içermeyen fruktoz ve sukroz grubuyla arasÕnda istatiksel bir farklÕOÕk gözlendi (P<0.05). Anormal spermatozoon oranlarÕnda ise gruplar arasÕfark bulunmadÕ . Sa÷lam plazma membranÕna sahip spermatozoon oranÕ ve canlÕ -sa÷lam plazma membranÕna sahip spermatozoon oranlarÕ açÕVÕndan CLC-trehaloz grubunda bulundu. Prematüre akrozom reaksiyonuna giren spermatozoon oranlarÕCLC içeren úeker gruplarÕnda CLC içermeyen gruplara göre önemli derecede düúük bulundu. CLC içeren ve CLC içermeyen gruplar arasÕndaki fark istatiksel olarak önemli bulundu (P<0.05). Sonuç olarak, kullanÕlan úekerlerin bazÕ parametreler üzerine etkisi önemli olmakla beraber CLC'nin koruyucu etkisinin çok daha belirgin oldu÷u saptandÕ. Anahtar Kelimeler: CLC, dondurma, fruktoz, koç spermatozoon, sükroz, trehaloz

The ram sperm undergo different type of damages during cryopreservation process which consequently results in low pregnancy rate in sheep. Among them damages the sperm membrane is the major factor that affects the sperm survival post-cryopreservation. Many studies have been conducted to minimize the adverse effect of cryopreservation on sperm plasma membrane. Therefore, the objective of present study was to protect the sperm membrane during cryopreservation by using different sugars (fructose, sucrose and trehalose) in combination with cholesterol in semen extenders. The information based upon post-thaw parameters would help to choose the best combination for ram sperm cryopreservation. Five KÕYÕ rcÕk rams were used and semen was collected using electro-ejaculator. Initial motility, concentration and abnormal sperm percentage were evaluated. After evaluation, semen was split into two parts: one was treated with CLC (3mg/120x106 sperm) and second remained untreated. After treatment, CLC treated and untreated parts was further divided into three aliquots and diluted with either fructose, sucrose or trehalose supplemented extenders. Then all the diluted aliquots were packed into straws and cooled to 4°C for two hours. After equilibration at 4°C, straws were frozen in liquid nitrogen vapor and stored in liquid nitrogen. Straws were thawed after freezing and sperm characteristics (motility, live/dead, membrane integrity, abnormal sperm and acrosome integrity) were estimated. The post-thaw results showed that there is no statistical difference in motility amongst the groups, however, CLC-trehalose (54.5±3.28%) and CLC-fructose (54±2.86%) has highest motility compared to other groups. Live sperm percentage was significantly (P<0.05) higher in CLC-fructose and sucrose as compared to untreated fructose and sucrose. There is no significant difference in abnormal sperm percentage between CLC treated and untreated group. CLC-trehalose has highest percentage of total intact membrane and live-intact membrane sperm compared to other groups. The CLC-treated groups has significantly (P<0.05) low percentage of sperm with reacted acrosome as compared to CLC-untreated sperm. In conclusion; although the sugars utilized in this study has influenced some of the post-thaw paramaters the protective influence of CLC on freezing ram spermatozoa was more prominent than sugars. Key words:CLC, cryopreservation, fructose, ram sperm, sucrose, trehalose