Farelerde hippo sinyal yolağı aktivatör ve inhibitörünün fetus gelişimi boyunca kalp hücreleri üzerinde etkisi

Abstract

Organ büyümesi dahil olmak üzere hücresel düzeyde meydana gelen çeşitli süreçlerde Hippo sinyal yolağı görev almaktadır. Hippo sinyal yolağının transkripsiyon ko-aktivatörü olan YAP birçok genin ekspresyonunda görev almaktadır. Bu nedenle Hippo sinyal yolağının aktivasyonunun veya inhibisyonunun kalp hücrelerinin gelişimi üzerine etkili olduğu düşünülmektedir. Benzer olarak Wnt sinyalizasyonu farklılaşma ve büyüme gibi çeşitli hücresel süreçlerde görev almaktadır ve Hippo sinyal yolağı ile ilişki göstermektedir.Bu çalışmada fareler kontrol (NT), DMSO, Verteporfin ve C2 Ceramide olmak üzere dört grubaayrıldı. Fetal gelişimin 18.5 gününde anneden alınan fetusların ağırlıkları değerlendirildi. 18.5 günlük fare embriyolarının kalp dokularında hippo sinyal yolağının aktivatörü olan Verteporfin ve hippo yolağı inhibitörü olan C2 Ceramide uygulanması sonrasında YAP, β-katenin, GATA-4 gibi genlerin immünohistokimya ile ifade düzeylerine bakıldı. Ayrıca kalp dokuları PAS, trikrom ve Hematoksilen-Eozin boyaları ile boyanarak morfolojik olarak değerlendirildi.Deney sonuçlarına göre Verteporfin uygulanan fetüslerin ağırlıkları diğer gruplara oranla anlamlı olarak düşük saptanmıştır. İmmünohistokimya sonuçlarına göre NT ve DMSO gruplarına oranla, Verteporfin grubunda YAP, β-katenin ve GATA-4 ifadesi anlamlı olarak azalırken, C2 Ceramide grubunda YAP, β-katenin ve GATA-4 ifadesi anlamlı olarak artmıştır. HE boyama ile morfoloji tüm gruplar arasında bir fark görülmemiştir. Trikrom boyama ile gruplar arası epikard ve miyokardda farklılık görülürken, PAS boyama ile Verteporfin grubunda farklılık saptanmıştır.Bu sonuçlar doğrultusunda Hippo sinyal yolağı kalp gelişiminde yer alan gen ifadelerine etki etmenin yanı sıra Wnt sinyalizasyonun anahtar proteini olan β-katenin ile de bu süreçlerde etkileşim kurmakta ve ifade düzeylerini etkilemektedir.

The hippo signaling pathway plays a role in various processes that take place at the cellular level, including organ growth. YAP, Hippo signaling transcription coactivator, is involved in the expression of many genes. Therefore, activation or inhibition of the hippo signaling pathway is thought to be effective on the development of heart cells. Also, Wnt signaling plays a role in various cellular processes such as differentiation, growth, and correlates with the Hippo signal pathway.In this study, mice were divided into four groups: control (NT), DMSO, Verteporfin and C2 Ceramide. The weights of the fetuses taken from the mother were evaluated at 18,5 days of fetal development. The expression levels of YAP, β-catenin, and GATA-4 genes in the heart tissues of 10.5 and 18.5 day old mouse embryos were examined by immunohistochemistry after administration of Verteporfin, an activator of the Hippo signal pathway and C2 Ceramide an inhibitor of hippo pathway. In addition, heart tissues were evaluated morphologically by staining with PAS, trichrome and hematoxylin-eosin stain.According to the results of the experiments performed, the weight of verteporfin applied fetuses was significantly lower than the other groups.According to the Results of immunohistochemistry, YAP, β-catenin and GATA-4 expression in the Verteporfin group were decreased significantly compared to NT and DMSO groups, whereas YAP, β-catenin and GATA-4 expression in the C2 Ceramide group increased significantly.There was no difference between the groups on morphology with HE staining. There was a difference in epicardium and myocardium between groups with trichrome staining, whereas there was a difference in Verteporfin group with PAS staining.