In vitro regeneration and analysis of phenolics in Digitalis ferruginea L. subsp. schischkinii (Ivan.) werner

Abstract

Digitalis ferruginea L. subsp. schischkinii (Ivan.) Werner'in kotiledon yaprağı ve hipokotil eksplantlarından etkili bir in vitro çoğaltım protokolü geli?tirilmi?tir. Sterilizasyondan sonra tohumlar çimlendirme ortamına alınmı? ve daha sonra çimlenen fidelerden eksplantlar izole edilerek, farklı bitki büyüme düzenleyicileri içeren MS ortamlarında (TDZ, BA, KIN, TDZ+IAA, BA+IAA, KIN+IAA, TDZ+IAA+GA3) kültüre alınmı?tır. En iyi sürgün olu?umu 2.0 mg/l TDZ ile 0.5 mg/l IAA içeren ortamdaki hipokotil eksplantından elde edilmi? ve eksplant ba?ına ortalama 11.0 sürgün olu?umu gözlemlenmi?tir. TDZ ve IAA'nın aynı konsantrasyonuna 0.5 mg/l GA3 eklendiğinde ise sürgün olu?umu eksplant ba?ına 6.5 sürgün vererek azalmı?tır. 1.0 mg/l BA ile 0.5 mg/l IAA içeren ortamda, hipokotil explantı ba?ına ortalama 6.16 sürgün elde edilmi?tir. Sürgün olu?umu için KIN ve IAA kombinasyonları uygulanmı? ve 2.0 mg/l KIN ve 0.5 mg/l IAA ortamı hipokotil explantı için ortalama 7.0 sürgün vermi?tir.Sonuç olarak, hipokotil eksplantı sürgün verimliliği açısından uygulanan bitki büyüme düzenleyicilerinde kotiledon yaprağı eksplantına göre daha etkili olmu?tur. Sürgün olu?umunu artırmada en etkili bitki büyüme düzenleyicisi TDZ ve IAA kombinasyonu olmu?tur. BA ve KIN'in oksinlerle kombinasyonunda TDZ kadar etkin olmamasına rağmen bu kombinasyonları içeren ortamlarda da sürgün, kallus ve kök olu?umu gözlemlenmi?tir. Ortamlardan elde edilen sağlıklı sürgünler oksin içeren ortamlara kök olu?umu için aktarılmı?tır. Sürgünlerde hızlı bir ?ekilde kök eldesi için en etkili oksin IAA olmu?tur. Köklenen sürgünler plastik saksılara aktarılmı? ve iklimlendirme i?lemi yapılarak, bitkilerin %70'nin hayatta kalması sağlanmı?tır.Toplam fenolik miktarı analizlerini içeren çalı?manın son bölümünde ise, köklenen sürgünler kurutularak, örnekler absorbans değerlerine göre UV-spectrofotometrede analiz edilmi?tir. Sonuçlar toplam fenolik miktarının farklı örnekler arasında önemli bir deği?iklik göstermediğini ortaya koymu?tur. TDZ ve IAA kombinasyonları arasında en yüksek toplam fenolik miktarı 0.2 mg/l TDZ'nin 1.0 mg/l IAA ile kombinasyonunda 1149.7 ?g/g dw olurken, KIN ve IAA kombinasyonları için en yüksek toplam fenolik değeri 0.5 mg/l KIN'in 1.0 mg/l IAA ile kombinasyonunda 1205.8 ?g/g dw olarak bulunmu?tur.

An efficient in vitro regeneration protocol was developed from cotyledonary leaf and hypocotyl explants of Digitalis ferruginea L. subsp. schischkinii (Ivan.) Werner. After sterilization, seeds were put on germination media, then seedlings were used as explant source. Explants were cultured on MS medium with different concentrations and combinations of plant growth regulators (TDZ, BA, KIN, TDZ+IAA, BA+IAA, KIN+IAA, TDZ+IAA+GA3). The best shoot proliferation was obtained from hypocotyl explants cultured on medium containing 2.0 mg/l TDZ and 0.5 mg/l IAA, with a mean of 11.0 shoots per hypocotyl explant. Shoot formation was decreased to 6.5 shoots when the same concentration of TDZ and IAA was combined with 0.5 mg/l GA3. 1.0 mg/l BA combined with 0.5 mg/l IAA produced a mean of 6.16 shoots per hypocotyl explant. The combinations of KIN and IAA were employed and 2.0 mg/l KIN combined with 0.5 mg/l IAA produced a mean of 7.0 shoots per hypocotyl explant, which was the highest shoot number achieved.Consequently, hypocotyl explants were more effective for shoot production than cotyledonary leaf explants. Among all PGRs, the combination of TDZ and IAA was the most effective for shoot formation. Although not being as effective as the combinations with TDZ, different concentrations of KIN and BA also produced shoots, calli and roots. After shoot formation, healthy shoots were transferred to auxin-containing medium to induce roots. IAA was the most effective medium for the rooting of the regenerated shoots. Rooted shoots were transferred to pots containing soil and their acclimitization was achieved, 70% of plantlets being survived.In the last part of the study involving total phenolic analysis, rooted shoots were dried and analyzed in accordance with absorbance values by UV-spectrophotometer. The results revealed that the total phenolic contents were not significantly different among the samples of different treatments. While the highest amount of total phenolic content was 1149.7 ?g/g dw in samples regenerated on medium containing 0.2 mg/l TDZ combined with 1.0 mg/l IAA among TDZ and IAA combinations, for KIN and IAA combinations the highest total phenolic value was 1205.8 ?g/g dw in 0.5 mg/l KIN combined with 1 mg/l IAA.