Metisiline dirençli staphylococcus aureus saptanmasında fenotipik ve genotipik yöntemlerin karşılaştırılması ve Staphylococcus Aureus`larda klonol yayılımın AP-PCR ile saptanması

Abstract

1. ÖZET Metisiline dirençli Staphylococcus aureus saptanmasında fenotipik ve genotipik yöntemlerin karşılaştırılması ve Staphylococcus aureus'X&r&a klonal yayılımın AP-PCR ile saptanması. Çeşitli infeksiyonlara yol açan Staphylococcus aureus nozokomiyal infeksiyon etkenleri arasında da ilk sıralarda yer almaktadır. Pek çok antibiyotiğe direnç kazanan stafilokok infeksiyonlarmda uygun tedavi yapılabilmesi için metisilin direncinin belirlenmesi gerekmektedir. Bu direncin saptanması amacıyla rutin laboratuvarlarda en çok antibiyotik duyarlılık testleri uygulanmakla beraber, en güvenilir sonuçlar PCR ile mecA geninin varlığının gösterilmesiyle alınmaktadır. MRSA, çoğul dirençli olmasının yanında, epidemilere yol açabilmesi nedeniyle de önemli bir sorun oluşturmaktadır. Günümüzde MRSA izolatların oluşturduğu epidemilerin araştırılmasında içinde arbitrarily-primed PCR (AP-PCR)'ın da yer aldığı genotipik yöntemler kullanılmaktadır. Çalışmamızda rutin bakteriyoloji laborotuvannda 75'i MRSA, 50'si MSSA olmak üzere stoklanan 125 Staphylococcus aureus izolatının disk difüzyon ve mikrodilüsyon ile elde edilen oksasilin duyarlılık sonuçlarıyla, PCR yöntemiyle saptanan mecA gen analizi sonuçlan karşılaştırıldı. MSSA izolatlarında heterojen direnci saptamak amacıyla bu direnci indükleyen çeşitli yöntemler uygulandı. İndüksiyon testleri sonucunda MİK değerleri orta derecede yükselen yedi suş da dahil olmak üzere MSSA izolatlarının hiçbirinde mecA geni saptanmadı. Buna karşın 75 MRSA izolatının 70'inde mecA geni saptandı. Beş izolatta ise tekrar edilen deneylere rağmen mecA varlığı gösterilemedi. Çalışmamızda, S.aureus izolatlarının bir epidemi kaynağı olup olmadığını AP- PCR yöntemi ile araştırıldı. MSSA izolatlarının bu yöntem ile 19 farklı tipe ^» *<^ayrılabildiği, MRSA izolatlarımızda ise 59 izolatın A paterninde, 13 izolatın D paterninde yer aldığı belirlendi. Kalan üç MRSA izolatının AP-PCR paternleri ise bu iki gruptan ve birbirinden farklı idi (B, C, E bant paternleri). A,D ve B paternleri arasında yalnız bir band farkı olduğu görüldü. Sonuçta MRSA izolatlarımn klonal olarak yayıldığı düşünüldü. Anahtar kelimelenMetisilin direnci, Stapylococcus aureus, mecA, AP-PCR

2. SUMMARY Comparison of the phenotypic and genotypic methods for the identification of methicillin resistant Staphylococcus aureus, and investigation of the spread of these isolates by AP-PCR Staphylococcus aureus, being the causative agent of various infections, has also been one of the major causes of nosocomial infections. In order to administer the appropriate therapy, methicillin resistance of this species, which has become resistant to several antibiotics, should be determined. Although routine susceptibility tests are mostly undertaken in general purpose microbiology laboratories to detect this resistance, the most accurate and reliable result is achieved by showing the presence of mecA gene with the PCR technique. MRSA is important not only because it is resistant to multiple antibiotics, but because it also causes nosocomial outbreaks. Genotypic methods, which include the arbitrarily primed PCR (AP-PCR) technique are employed in the investigation of epidemics related with MRSA isolates. In this study, we compared the results of meek gene determination using PCR, with that of disk diffusion and microdilution methods to reveal resistance in 125 Staphylococcus aureus isolates, of which 75 were grouped as MRSA, and 50 as MSSA in routine bacteriology laboratory. We employed some induction techniques to enable the MSSA isolates to exhibit heterogenous resistance. We did not detect mecA gene in none of the MSSA isolates including the seven isolates in which MIC values were moderately increased by induction. We detected mecA gene in 70 out of 75 MRSA isolates; the remaining five lacked the gene.We further explored whether these isolates caused an epidemic using AP-PCR method. MSSA isolates yielded 19 different patterns, whereas 59 MRSA isolates yielded pattern A, 13 yielded pattern D, 3 yielded patterns B, C, and E. Patterns A, D, and B were differed only in one band. We concluded that the MRSA outbreak was clonal overall. Key words: Methicillin resistant, Staphylococcus aureus, meek, AP-PCR