Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yöntemiyle IGHD (izole büyüme hormonu eksikliği) tip 1A olguların belirlemesi

Abstract

ÖZET Moleküler biyolojide son yıllarda ortaya çıkan gelişmeyle beraber bir çok genetik hastalığın tanısının konulması oldukça kolaylaşmıştır. Özellikle son yıllarda gelişen PCR ( Polimeraz zincir reaksiyonu ) tekniği bir çok genetik hastalığın tanısının konulmasında hız ve doğruluğu sağlamasıyla Southern- blot tekniğine alternatif olarak ön plana çıkmaktadır. İzole büyüme hormonu yetersizliği tip 1A büyüme hormonu 1 geninin delete olması ile ortaya çıkan kalıtsal bir hastalıktır. Bu gen, kendisi ile birlikte toplam beş geni içeren büyüme hormonu gen bölgesinde bulunmaktadır. Bu genler birbirleri ile oldukça yüksek bir sekans homolojisi göstermekte ve buna bağlı olarak meydana gelen kross-over sonucunda büyüme hormonu -1 geninide içeren değişik büyüklükte delesyonlar meydana gelmektedir. Delesyonların saptanmasında polimeraz zincir reaksiyonu ile büyüme hormonu-1 geninin yan sekanslarının amplifikasyonu ve bu amplifikasyon ürünlerinin Sma I restriksiyon enzimi ile kesilmesi yöntemi kullanılmıştır. Polimeraz zincir reaksiyonu ile genin 51 ve 31 uçlarında bulunan ve rekombinasyon olayının meydana geldiği iki dizi çoğaltılmıştır. Bu dizilerin farklı restriksiyon enzim bölgeleri içermeleri saptamada ki temel dayanak noktasını oluşturmaktadır. Yapılan çalışmalar sonucunda, bir bireyde büyüme hormonu-1 geninide içeren 7,0 kb'lık delesyon saptanmıştır. Elde edilen sonuç bugüne kadar yayınlanan, bu tip delesyon gösteren üçüncü birey olması açısından önemlidir.

SUMMARY Diagnosis of many genetic disorders became easy by the achivemerrt in molecular biologycal techniques in recent years. Especially PCR technique was developed as an alternative to the Southern-Blot in accurracy and precision, Isolated Growth Hormone Deficiency type 1 A is a genetic disorder resulting from the deletion in growth hormone gene cluster. Cluster includes five growth related genes with high rate of sequence homology causing different size deletions as a result of unbalanced crossing over. To detect the possible deletions; PCR amplification of growth hormone gene 1 flanking regions and Sma I endonuclease digestion was used. PCR amplified sequences where the crossing over occures are localized at the 5' and 3' flanking regions of growth hormone 1 gene. Presence of restriction sites for different endonucleases in these sequences construct the base of the method. In these study we demonstrated a 7.0 kb gene deletion of GH-1 gene in one patient as the third case published in this field.