Down sendromunun in situ hibridizasyon (ISH) ile gösterilmesi

Abstract

ÖZET Sftogenetîk yöntemlerle kromozomal anomalilerin araştırılması 1950'li yılların sonunda uygulamaya girdi. Bantlama ve boyama yöntemlerindeki gelişme, hastalıkların kromozom al temellerinin aydınlatılmasında önemli ilerlemelere yol açtı. Kalıtsal madde, deoksiribonükleik asidin moleküler analizi ve belirli dizilerinin eldesi molekuler genetik çalışmalara giderek artan uygulama alanı kazandırdı. İşaretli DNA problarının doğrudan kromozomda DNA ile hlbridlzasyonuyla In Situ Hibridlzasyon(ISH) tekniği kuruldu. Bu teknikle belirli kalıtsal özelliklerin kromozomlardan yerleşimleri tanımlandı. Bu çalışmada in situ hibridizasyon tekniği kullanılarak Down Sendromlu hastalarda Trizomi 21 araştırılması amaçlandı. Prob olarak Coatosome 21 total kromozom painting probu(Oncor INC.) kullanıldı. Başlangıçta Oncor protokolüne bağlı çalışıldı. Optimizasyon çalışmalarında elde edilen verilere bağlı olarak prob denatürasyonu, bloklama ve görüntülemede modifikasyonlar yapıldı. Prob denatürasyonu 37 °C de, 2.5 saat bekleme yerine 90 °C de 5 dakika bekletilme sonrası buza kaldırılması şeklinde uygulandı. Bloklama yaplmayan çalışmalarda daha iyi hibridizasyon sağlandığı görüldü. Set İçinde sağlanan floresein izotiyosiyanat (FITC) ve propidyum iyodld(PI) ile floresan görüntü elde edilemedi. Akildin OranJ'la yapılan kontrolde kromozomların bulunduğu görüldü. Görüntüleme için enzimatik yöntem (Avidin-Peroksidaz sistemi) adapte edilerek sonuç elde edildi. Çalışılan normal ve Down Sendromlu hastalarda 21.kromozomda değerlendirilecek düzeyde In situ hibridizasyon elde edildi.

SUMMARY The research on chromosomal abnormality by cytogenetic methods Introduced to the application at end of 1950's. The improvements in banding and staining techniques provided the progressive resolution on chromosomal basis of illness. Molecular analysis of deoxyribonucleic acids as genetic material and obtaining specific sequence progressively added new application. In situ hybridisation techniques established by using the labeled DNA probe In chromosomal DNA hybridisation. Several inherited character localised on chromosomes by this technique. The aime of the work were to establish in situ hybridisation techniques for detection of trisomy 21 in Down Syndrome. Coatosome 21 total chromosom painting probe (Oncor Inc.) used as probe in the research. In the beginning Oncor protocol were followed. The method modified according to the result obtained in optimisation steps. They were related to probe denaturation, blocking and probe detections. Improvement In the result obtained in probe denaturation by incubation 90°C for 5 min, instead of 37°C 2.5 hours and also conseliing of denaturation step. Fluorescence observation can not be obtained from fluorescein isothlocyanate(FITC) and propidium iodide(PI) which supplied in the set Existence of the chromosome on the slide observed by acrydine orange staining. Enzymatic detection were adapted and positive result observed. Valuable result obtained in the application of in situ hybridisation to detect chromosome 21 related normal and patients with Down Syndrome. Ill