Sitomegalovirüs DNA` sının gösterilmesinde polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yönteminin uygulanması

Abstract

ÖZET Son yıllarda moleküler biyoloji büyük bir gelişme göstermiştir. Bu gelişmeler arasında polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) önemli bir yer tutmaktadır. Özellikle virüsler gibi kültürü yapılamayan veya kültürde tanısı çok uzun süren enfeksiyon etkenlerinin tanısında yaygın bir uygulama alanı bulmuştur. CMV (sitomegalovirüs) insan vücuduna birkez girdikten sonra yıllar boyunca latent olarak kalabilmekte ve latent CMV enfeksiyonu belirli etkenlerle, herhangi bir anda aktive olabilmektedir. Reaktivasyonda en önemli etken immünosüpresyondur. CMV tanısında viral kültür duyarlı ve güvenilir bir teşhis yöntemi olmasına karşın, uzun süre sonra sonuç vermesi ve zahmetli bir teknik olması gibi önemli dezavantajlara sahiptir. PCR sahip olduğu yüksek duyarlılık, özgüllük ve kısa sürede (24-48 saat) sonuç vermesi açısından CMV'ün tanısında önemli bir tekniktir. Bu çalışmada CMV şüphesi altındaki hastaların ve kan donörlerinin periferik kanlarından CMV'un geç antijenlerine spesifik (LA 1 ve LA 6) ve erken antijenlerine spesifik (MIE 4 ve MIE 5) primerleri kullanılarak PCR yöntemi ile CMV DNA 'sini araştırdık. Çalışılan pozitif kontrollerde amplifikasyon saptanırken, hasta ve donörlere ait DNA örneklerinde her iki primerlede yapılan amplifikasyonlarda CMV DNA'sı saptanmadı.

SUMMARY Molecular biology has a great dynamism the latest two decades. Molecular cloning, sequencing, and characterizations of biomolecules are the milestones of this dynamic process. To carry out of these techniques and get solution about unknown sides and some biological phenomena, polymerase chain reaction (PCR) is essential and basic laboratory system. PCR is the largely used in the diagnosis of infectious agents, such as viruses, which are unable to culture or necessitate long culture time. Among these, Cytomegalovirus (CMV), once introduce to body, it became latent for along life, but it can be activated by certain effects at any time in this period. For this reactivating, immunosupression is the most important factor. Viral culture allows sensitivity and reliability in the diagnosis, but requirements for along time interval and difficulty are the major disadvantages. As PCR is a specific, sensitive and rapid technique, it is important for diagnosis of CMV. We studied to amplify the DNA which is isolated from the blood donors and suspected CMV patients by PCR technique using the `Major Immediate Early` and Late Antigen` primers. As a coclusion, we have not found any amplification band on agarose gel in the blood donors and patients as compared to positive controls.