Etidyum bromidin (EtBr) in vitro insan lenfositlerine etkisinin SCE yöntemi ile gösterilmesi

Abstract

ÖZET Çağımızda insanların çevresel mutajenik etkilere maruz kalması sürekli olarak artabilmektedir. Araştırmacılar yeni teknikler geliştirerek mutajenite çalışmalarını ilerletmektedirler. SCE (kardeş kromatid=sister chromatid exchange) yöntemi; günümüzde genotoksisiteyi gösteren hassas bir indikatörlerden biri olarak tanımlanmakta ve gelecekte de bu amaca hizmet edeceği belirtilmektedir. Bu yöntem de, timin analoğu olan 5-bromo-2 deoksiüridin ile kromozomlar işaretlenip, FPG (Fluoresence plus giemza)boyama yöntemi ile boyanarak boyama sonunda kromozomların açıklı-koyulu bölgeleri sayılarak SCE frekansı hesaplanabilmektedir. Yaptığımız çalışmada etidyum bromidin son konsantrasyonları 2ng/ml, 1xg/ml, 0.60j,g/ml, 0.50ng/ml, 0.30(xg/ml, 0.25ng/ml, 0.15ng/ml ve 007xg/ml olacak şekilde in vitro şartlarda, insan lenfosit hücrelerine etkilerini inceledik. Son konsantrasyonları 2jıg/ml, olacak 1jj,g/ml, 0.60ng/ml, 0.30^g/ml ve 0.07ng/ml olacak şekilde mitomisin C'yi pozitif kontrol olarak çalıştık. Sonuçta EtBr'in çalıştığımız konsantrasyonlarda, SCE oluşumunu etkilediği ancak bu etkinin yüksek olmadığı ve mitomisin C kadar da genotoksik olmadığını gözlemledik.

SUMMARY At our age humans being exposed to- the effects of environmental mutagens has already come to the step of their life style. Scientists try to receive result by developing new techniques. Today, SCE is identified as a sensitive method for showing genotoxicity and defined to service to this aim also in the future. This method based on observing the breaks in DNA, after marking the chromosomes with 5-bromo-2'- deoxyuridine and staining by the FPG method. SCE frequency is calculated by counting the harlequin points on the chromosomes. In our study we investigated the in vitro effects of Ethidium bromude at the finai concentrations of 2p/ml, 1(j/ml, O.SOjj/mi, 0,50jj/ml 0,30jj/ml, O^Sjj/mi, 0,15y/ml, 0,Q7}j/mi, to human iymphosyte cells. JVUtomicin C was also studied as a pozitive control at 2jJ/ml, 1}j/ml, 0,60j/ml, 0,3Qp/ml and 0,07{j/mi final concentrations.