Diyabetik tavşan eritrosit iskelet proteinlerinde glikasyon ve oksidatif değişiklikler

Abstract

ÖZET DİYABETİK TAVŞAN ERİTROSİT İSKELET PROTEİNLERİNDE GLÎKASYON VE OKSİDATÎF DE?İŞİKLİKLER Halil RESMİ Diyabet, yaygın komplikasyonları olan bir hastalıktır. Diyabette en önemli moleküler değişiklik artmış protein glikasyonudur. Son zamanlarda yapılan bazı in vitro çalışmalar direkt glikasyon reaksiyonu yanında, glikozun otooksidasyonu yoluyla da protein glikasyonu oluşabileceğini ortaya koymuştur. Otooksidatif glikasyon olarak adlandırılan bu süreç, serbest oksijen radikalleri oluşumu ile birlikte yürümektedir. Serbest oksijen radikalleri ise proteinde oksidasyona, dolayısıyla protein hasarına yol açmaktadır. Bu araştırmanın amacı, tavşanlarda deneysel diyabet modeli kullanarak proteinlerde glikasyon ve oksidasyon olaylarına ilişkin veriler elde etmektir. Bu amaçla, diyabet oluşturulan tavşanlann plazma ve membran örneklerinde; aynca seçimli çözünürleştirme, jel filtrasyon kromatografisi ve saflık kontrolü amacıyla SDS-PAGE teknikleri kullanarak sataştırdığımız spektrin örneklerinde glikasyon ve oksidasyon ölçümleri yaptık. Okside protein ölçümleri, sülfidril grubu oksidasyonu gösteren cDDP bağlama ve yeni karbonil oluşumunu belirten karbonil grupları ölçümleri yapılarak gerçekleştirildi. Diyabetik plazma proteinlerinde fruktozamin, cDDP ve karbonil, total membranda glike protein, cDDP ve karbonil ile spektrin cDDP değerlerinde kontrollerine göre istatistiksel olarak anlamlı farklılık varken, kontrol ve diyabetik glike protein düzeyleri arasında istatistiksel olarak anlamlı farklılık bulunmamıştır. Sonuçlarımız diyabetik koşullarda, protein oksidasyonunun meydana geldiğini ortaya koymaktadır. Bu sonuçlann, diyabet sürecinin oluşturduğu uzun-dönem dokusal değişikliklerin açıklanmasına katkıda bulunacağı inancındayız. Anahtar sözcükler Diyabet, protein glikasyonu, protein oksidasyonu, spektrin

SUMMARY GLYCATION AND OXIDATIVE CHANGES IN DIABETIC RABBIT ERYTHROCYTE CYTOSKLETAL PROTEINS Halil RESMİ Diabetes is a pathology with a wide range of complications. The most important molecular change in diabetes is the elevation of protein glycation. Some of the recent in vitro studies have demonstrated that, besides the direct glycation reaction, protein glycation can also occur through the autoxidation of glucose. This process, named `autoxidative glycation`, takes place parallel to the formation of free oxygen radicals. Free oxygen radicals, in turn, cause oxidation and, therefore, defects in protein structure. The objective of this investigation is to elucidate the glycation and oxidation events in proteins, in diabetes, using a rabbit experimental diabetes model. Measurements of glycation and oxidation were performed in the plasma and membrane samples of diabetes-induced rabbits, and also in the spectrin samples purified following selective solubilization, gel filtration chromatography and tested for purity using SDS-PAGE. The cDDP binding assay showing the sulfhydryl group oxidation and the carbonyl group assays revealing the newly formed carbonyl groups. Fructosamine, cDDP, and carbonyl groups showed statistically significant differences between the diabetic and control groups for the plasma proteins, while cDDP binding and the carbonyl group levels were significantly different in diabetic total membrane proteins, and cDDP binding was significantly different in diabetic rabbit erythrocyte spectrin. Our data clearly demonstrate the oxidation of proteins in diabetic conditions. We believe that these results will contribute to the elucidation of long-term changes at the tissue levels in the process of diabetes. Key words: Diabetes, protein glycation, protein oxidation, spectrin