Mesane karsinomlarında human papillomavirus varlığının, TP53 ve HA-RAS nokta mutasyonlarınının rolünün moleküler biyolojik yöntemler ile araştırılması

Abstract

ÖZET MESANE KARSİNOMLARINDA HUMAN PAPILLOMAVIRUS VARLIĞININ, TPS3 VE HA-RAS NOKTA MUTASYONLARININ ROLÜNÜN MOLEKÜLER BİYOLOJİK YÖNTEMLER İLE ARAŞTIRILMASI HAYRİYE VERDA ERKIZAN ANAHTAR KELİMELER Mesane Kanseri, HPV, HA-RAS, TP53, Mutasyon, PCR-SSCP Tranzisyonel Hücreli Mesane Kanserinin (THK) oluşumunda ve gelişiminde TP53, HA-RAS ve Human Papillomavirusunun (HPV) rolleri konusundaki tartışmalı verilerden yola çıkarak, bu çalışma ile mesanenin primer ve reküren yüzeyel THKinde TP53, HA-RAS mutasyonlarının frekansı ile HPV nin varlığının araştırılması amaçlandı. Yirmi hastanın hem primer hem de reküren tümörlerine ait toplam 91 arşiv materyali kullanıldı. HA-RAS birinci ekson, TP53 5-6, 7 and 8 ekson primerleri ve HPV nin MY09/MY11 primerleri ile PCR gerçekleştirildi. HA-RAS 12. kodon nokta mutasyonlarım belirlemek için Hpa II enzimi ile HA-RAS amplifıkasyon ürünleri kesildi. Single strand conformation polymorphism (SSCP) ve gümüş boyama ile TP53 aplifıkasyon ürünlerindeki mutasyonlar belirlendi. Primer tümörlerin % 22 sinde ve sekonder tümörlerin % 21 HPV DNA varlığıbulundu. HA-RAS mutasyonları primer tümörlerin %17 sinde ve sekonder tümörlerin %21 sinde tespit edildi. TP53ün 5 6 eksonunda. primer tümörlerin % 8 sinde, sekonder tümörlerin %1 Onunda mutasyon bulunurken, TP 5 3ün 8. Eksonunda sadece sekonder tümörlerin %60ımda mutasyon saptandı. Fakat oranlar istatistiki olarak anlamlı bulunmadı. TP 5 3 geninin 7 eksonunda mutasyon bulunamadı. Bu veriler HPV nin THKnm oluşumu için etiyolojik ajan olabileceğini HA-RAS ve TP 5 3 8. ekson mutasyonlarının yüzeye! mesane kanseri gelişiminde önemli olabileceğini gösterilebilir. *Bu çalışma D.E.Ü. Araştırma Fon Saymanlığınca 0923.96.01.02 nolu proje olarak desteklenmiştir.

ABSTRACT THE INVESTIGATION OF THE PRESENCE -OF HUMAN PAPILLOMAVIRUS AND THE ROLES OF TP53, HA-RAS MUTATIONS IN BLADDER CANCER BY USING MOLECULAR BIOLOGICAL METHODS HAYRİYE VERDA ERKIZAN KEY WORDS Bladder Cancer, HPV, HA-RAS, TP53, Mutation, PCR -SSCP Starting with the conflicting data on the role of TP53, HA-RAS mutations and presence of HPV in the development and progression of TCC in bladder, this study aimed at the investigation of the mutation frequency of HA-RAS and TP53 as well as the presence of the HPV in primary and their recurrent superficial bladder cancers. Ninety one archival tissues obtained from 20 patients with both primary and their (secondary) recurrent tumors were used. PCR was performed using HA-RAS, iSl exon, TP53 5-6th, 7th and 8th exons primers, and MY09/MYİ 1 primers of HPV. To detect codon 12 point mutations of HA-RAS amplification products were digested with Hpa II enzyme. Single strand conformation polymorphism (SSCP) with silver staining was performed to detect mutations in the amplified products of TP53. We found HPV presence in 22 % of primary and 21% of secondary tumors. HA-RAS mutations were present in 17 % of primary and 21% of secondary tumors. For 5-6th exons of TP53, 8% of primary, 1 0 % of secondary tumors were mutant, while for 8tn exon of TP53 60 %> of secondary tumors were mutant. However the difference between mutation ratios of primary and secondary tumors are not statistically significant. No mutation was found in the 7th exon of TP53 gene. These data suggest that HPV may have a role as an etiologic agent for development of TCC. HA-RAS and 8th exon of TP53 mutations might have been essential in the progression of superficial bladder cancer * This study granted by of D.E.Ü. 0923.96.01.02.