Kronik miyeloid lösemide interferon-alfa tedavisine yanıt oluşumunda etkili mekanizmaların moleküler biyolojik yöntemler ile araştırılması

Abstract

A. ÖZET KRONİK MİYELOİD LÖSEMİDE İNTERFERON-a TEDAVİSİNE YANIT OLUŞUMUNDA ETKİLİ MEKANİZMALARIN MOLEKÜLER BİYOLOJİK YÖNTEMLER İLE ARAŞTIRILMASI Zeynep Yüce SERCAN Anahtar Kelimeler KML, sitogenetik yanıt, interferon-a,ICSBP1 Kronik miyeloid lösemi (KML) sağaltımında, interferon-a sıklıkla tercih edilen bir ajandır, interferon tedavisinin bir grup hastada çok iyi sonuç verdiği, yaşam kalitesi ve süresini uzatığı kabul edilmektedir. Ancak KML hastalarının bir bölümünün interferon tedavisine, diğer konvansiyonel kemoterapötiklerle karşılaştırıldığında farklı yanıt vermiyor olması da yine gözlenen bir gerçektir. KML hastaları içersindeki interferona yanıt veren populasyonun önceden belirlenmesine yönelik pek çok araştırma halen sürdürülmektedir. Bu alt populasyonun özelliklerini araştırmak amacıyla, interferon tedavisi gören 15 KML hastasında ICSBP1 (Interferon konsensüs sekansa bağlanan protein) genindeki ekspresyon değişikliklerini yarı-kantitatif olarak saptanmıştır, internal iç kontrol olarak, aynı primer çifti ile amplifiye olan ve insan ICSBP dizisi ile arasında 6 bp'lik büyüklük farkı bulunan bir ICSBP 1 genini barındıran fare hücreleri (3T3 NIH hücre hattı) laıllanılmıştır. Öncelikle, bilinen miktarda fare hücresinden izole edilen RNA, revers transkriptaz (RT) ile cDNA'ya çevrildikten sonra, sabit miktarda cDNA alınarak, ICSBP primerleri ile kontrol populasyondan (hasta olmayan sağlıklı birey kanları) izole edilen RNA ile birlikte amplifiye edilmiştir. Dansitometrik okuma ve istatistiksel analizlerden sonra normal populasyon için belirli bir güven aralığındaki normal populasyon RNA / fare RNA' sı, ICSBP ekspresyon oranı elde edilmiştir. Aynı işlemler daha sonra hasta populasyonumuzda uygulanmış, sonuçlar normal populasyondan elde edilen oranlar ile karşılaştınlmıştır. Elde edilen değerler, hastaların tedaviye verdikleri sitogenetik cevap ile ile birlikte yorumlandığında, majör sitogenetik cevap ile ICSBP 1 geninin ekspresyon düzeyi arasında, anlamlı doğrusal bir ilişki olduğu gözlenmektedir. IV

B. ABSTRACT INTERFERON CONSENSUS SEQUENCE BINDING PROTEIN (ICSBP1) EXPRESSION LEVELS İN CHRONIC MYELOGENEOUS LEUKEMIA PATIENTS AND ITS RELATIONSHIP TO CLINICAL RESPONSIVENESS Zeynep Yüce SERCAN Key Words CML, cytogenetic remission, interferon-a, ICSBP1 Chronic myeloid leukemia (CML) is a myeloproliferative disorder of the primitive hematopoetic stem cell. At present interferon-a (IFN-a) is widely used in the treatment of CML. However, the response to IFN-a treatment is variable. It induces complete hematologic remission in a large group of patients, but is ineffective in the remaining cases. Many investigational studies have been preformed to elucidate the biological mechanisms underlying the differences in response to therapy. We have studied the interferon consensus sequence binding protein (ICSBP1) expression levels in 15 CML patients by using a competitive semi-quantitative PCR method. RNA from the 3T3 murine cell line -in which the ICSBP1 mRNA is 6 bp shorter in the amplified region- was used as a internal competitive control. Results were compared with cytogenetic responsiveness and a lineer relationship was found between major cytogenetic responses and high ICSBP1 expression levels. te..;..-,...v