Tc-99m HMPAO ile işaretlemenin lenfosit fonksiyonları ve lenfosit DNA`sı üzerine etkilerinin In vitro araştırılması

Abstract

VII ÖZET: Tc-99m HMPAO işaretli lökositler infeksiyon ve inflamasyon tanısında standart bir diagnostik prosedür olarak kullanılmaktadır. Bazı araştırmacıların lökositleri Tc-99m HMPAO ile işaretlemenin hücreler üzerinde zararlı etkileri olduğuna işaret etmelerine rağmen iyonize radyasyonun lenfosit fonksiyonları üzerindeki etkileri hakkında yeterli bilgi bulunmamaktadır. Bu çalışmada Tc-99m HMPAO ile işaretlemenin lenfosit adezyonu, proliferasyonu, migrasyonu ve apoptoz oluşumu üzerindeki etkilerini araştırdık. Lenfosit popülasyonu olarak NC-NC lenfobastoid hücre hattını kullandık. Hücreler % 10'luk ısıyla inaktive edilmiş fetal calf serumu (FCS) içeren RPMI 1640 besi ortamında 37 °C'de % 5'lik C02'li hava içerisinde üretildi ve standart prosedürle 13.5 mCi Tc-99m HMPAO ile işaretlendi. Kontrol grubu hücrelere Tc-99m HMPAO ile işaretleme haricinde aynı prosedür uygulandı. Tc-99m HMPAO ile işaretleme hücre adezyonu, proliferasyonu ve motilitesini azaltırken apoptoz oluşturdu ve hücre döngüsünü durdurdu. Proliferasyon çalışmaları işaretlemeyi takiben 24 saat aralı sürelerle MTT testi uygulanarak gerçekleştirildi, işaretlemeden sonraki 4.gün'de proliferasyonda % 70'lik bir azalma kaydedildi. Tc-99m HMPAO ile işaretleme, hücrelerin fîbronektin yüzeye adezyonununda % 35'lik bir azalmaya yol açtı. Boyden chamber motilite testini kullanarak, Tc-99m HMPAO ile işaretlemenin hem spontan hem de kemotaktik ajan MCP1 ile uyarılmış lenfosit motilitesini etkili bir biçimde bloke etti. Motilite azalmasındaki oran yaklaşık olarak 5 kattı. Buna ek olarak Tc-99m HMPAO ile işaretli hücrelerde görülen apoptoz oluşumu kontrol grubu hücrelere göre 12 kat daha fazlaydı. Bunun yam sıra Tc-99m HMPAO ile işaretlemenin ardından 3. günde hücre döngüsü durdu. Sonuç olarak verilerimize dayanarak, Tc-99m HMPAO ile işaretleme lenfosit fonksiyonlanndan hücre adezyonu, proliferasyonu, motilitesi ve canlılığı üzerinde hasar verici etkiler oluşturduğunu belirledik. Bu nedenle klinik uygulamalarda bu yöntem kullanıldığında dikkatli olunmalıdır. Bu etkilerin mekanizmalarına yönelik çahşmalanmız devam etmektedir.

vın SUMMARY: Tc-99m HMPAO labeled leucocytes have been used as a standard diagnostic procedure for the detection of infection and inflammation. Although, some investigators have already pointed out that labeling of leucocytes with Tc-99m HMPAO has detrimental effects on the cells, still very little is known regarding the effects of ionizing radiation on lymphocyte functions. In this study, we evaluated the effects of Tc-99m HMPAO labeling on lymphocyte adhesion, proliferation, migration and apoptosis. We used NC-NC lymphoblastoid cell line as the lymphocyte population. The cells were growth in RPMI 1640 supplemented with 10 % heat-inactivated fetal calf serum at 37°C in an atmosphere of 5% C02 in air and labeled with 13.5 mCi Tc-99m HMPAO with standart procedure. The cells were treated with the same labeling procedures except Tc-99m HMPAO addition was omitted in the control group. Tc-99m HMPAO labeling decreased cell adhesion, proliferation and motility whereas induced apoptosis, and cell cycle arrest. Proliferation assays were performed both using Mil and ELISA tests with 24 hours intervals following labeling. It was recorded that the rate of decrease in proliferation was up to 70% by the 4th day after labeling. Tc-99m HMPAO labeling led a 35 % decrease on adhesion ability of the cells on fibronectin. With using Boyden chamber motility assay, it was shown that both spontaneous and MCP-1 induced lymphocyte motility were potently blocked by Tc-99m HMPAO labeling. The rate of decrease in motility was approximately five times. In addition, we obtained a 12 times increase in the apoptosis rate within the Tc-99m HMPAO treated cells compared to the control cells. Besides it was observed that cell cycle arrest was induced starting from 3rd day after Tc-99m HMPAO treatment. In conclusion, based on our data Tc-99m HMPAO labeling has damaging effects on lymphocyte functions including cell adhesion, proliferation, motility and viability. Therefore, care should be given when choosing this procedure during clinical applications. Our studies on the mechanisms of these effects are still in progress.