Prepubertal sıçanlarda busulfan ile oluşturulan testis hasarına alfa lipoik asitin etkisi

Abstract

Yöntem: Çalışmamızda Wistar suşu erkek sıçanlar 4 gruba (n=7) ayrıldı. I. grup;Kontrol: 5 hafta, oral gavaj ile serum fizyolojik uygulandı. II. grup; Busulfan grubu;; 10mg/kg Busulfan 21 gün ara ile iki doz olacak şekilde intraperitoneal yöntemle verildi.III. grup; Alfa Lipoik Asit: 5 hafta, oral gavaj ile 35 mg/kg Alfa Lipoik Asit uygulandı.IV. grup; Alfa Lipoik Asit + Busulfan: ilk doz 10 mg/kg Busulfan uygulandıktan bir günsonra 35 mg/kg Alfa Lipoik Asit verilmeye başlandı ve 5 hafta deney süresince hergün uygulandı. Deneyin 21. günü ikinci doz 10 mg/kg Busulfan uygulandı. Deneysonunda tüm denekler sakrifiye edildi. Deneklerin sol testisleri, Hematoksilen & eozin(H&E), periyodik asit schiff (PAS), TUNEL ve aktif kaspaz-3 boyamaları için ayrıldı.Sağ testisleri ise Glutatyon (GSH), glutatyon peroksidaz (GPx) ve malondialdehit(MDA) düzeyleri için ayrıldı.Bulgular: Testiste yapılan histolojik ve morfometrik değerlendirmeye göre, Busulfangrubunun kontrol ve Alfa Lipoik Asit grubuna göre hasarlı olduğu ancak ALA+BUSgrubunda Alfa Lipoik Asit'in bu hasarı önleyemediği gözlendi.İmmunohistokimyasal olarak Tunel ve Aktif Kaspaz-3 boyaması ile pozitif hücrelersayıldı. Kontrol grubuna göre Busulfan ve ALA+BUS gruplarında apoptotik hücresayısı anlamlı derecede arttığı gözlendi. Kontrol grubu ve Alfa Lipoik Asit grubundaanlamlı bir değişiklik olmadığı gözlendi. Busulfan ve ALA+BUS grupları arasında daapoptotik hücre sayısı açısından anlamlı bir fark olmadığı gözlendi.Biyokimyasal olarak MDA, GPx ve GSH krtlerr kullanılarak ölçüm yapıldı. MDAdeğerleri, kontrol ve Alfa Lipoik Asit gruplarına göre Busulfan grubunda anlamlıderecede yüksek bulundu. Kontrol grubu ve Alfa Lipoik Asit grubu arasında anlamlıbir fark olmadığı gözlendi. Busulfan grubuna göre ALA+BUS grubunda MDA değerianlamlı olarak yüksek bulundu.GSH değerleri, kontrol grubuna göre Busulfan grubunda anlamlı derecede düşükbulundu. Kontrol grubuna göre Alfa Lipoik Asit grubunda anlamlı derecede yüksekbulundu. Busulfan grubuna göre ALA+BUS grubunda GSH değeri anlamlı derecedeyüksek bulundu.GPx değerleri, kontrol grubuna göre Busulfan grubunda anlamlı derecede düşükbulundu. Kontrol grubu ile Alfa Lipoik Asit ve ALA+BUS grupları arasında anlamlı birfark olmadığı gözlendi. Busulfan grubuna göre ALA+BUS grubunda GPx değerianlamlı derecede yüksek bulundu.Sonuç: Elde ettiğimiz bulgular doğrultusunda Busulfan'ın testis de doku hasarıoluşturduğunu ve apoptozu arttırdığını gözlemledik. Ancak koruyucu ajan olarakkullanılan Alfa Lipoik Asit'in Busulfanla birlikte kullanımında kotuyucu/tedavi edicietkisini gözlemleyemedik.Anahtar Kelimler: Busulfan, Alfa Lipoik Asit, Testis

Objective: In this study we aimed to investigate protective effects of Alpha Lipoic Acid, a strongantioxidant, against possible negative effects of busulfan, on testes of male ratshistolochemically, imunohistochemically and biochemically.Method: 21 Wistar albino rats were divided into 4 groups (n=7). I.control goup: rates weregivin normal saline orally for 35 days. II.Busulfan group : rates were given busulfantwice daily for 21 days in a dose of 10mg/kg , intraperitoneally. III.alpha lipoic acidgroup: rates in this group were given alpha lipoic acid orally in a dose of 35mg/kg for5 weeks. IV.alpha lipoic acid + busulfan group: in this group rates were given the fisrtdose of busulfan in a dose of 10mg/kg on the first day . on the seconde day alphalipoic acid started to be given in adaily dose of 35mg/kg for 5 weeks. the secondedose of busulfan was given in a dose of 10mg/kg on 21.day of the experiment.At the end of the experiment, all subjects were sacrificed. the left testests of the rateswere prepared for hematoxylene & eosine (H&E), periodic acid schiff (PAS), TUNELand active caspase-3 painting. The right testeses of the rates were evaluatedbiochemically by Glutathion (GSH), glutathion peroxidase (GPx) andmalondialdehyde (MDA).Result: According to histologic and morphometric evaluation on testicles, it isobserved that Busulfan group is damaged when compared to control and AlphaLipoic Acid group, however in ALA+BUS group Alpha Lipoic Acid is not able toprevent the damage. The positive cells are counted immunohistochemically withTunel and Active Caspas-3 coloring. It is observed that the apoptotic cell amounthas risen significantly in Busulfan and ALA+BUS groups when compared to thecontrol group. It is also observed that there is no significant difference betweenBusulfan and ALA+BUS groups in terms of apoptotic cell amount. Themeasurements have been conducted biochemically by MDA GPx and GSH kits.MDA values are found significantly higher in busulfan group than in control groupand Alpha Lipoic Acid group. No significant difference is observed betweencontrol and Alpha Lipoic Acid groups. Compared to Busulfan group, the MDAvalue is found significantly high in ALA+BUS group.GSH values are found significantly low in Busulfan group when compared tocontrol group. And when compared to control group, GSH values are foundsignificantly high in Alpha Lipoic Acid. GSH values are found significantly high inalabus group when compared to Busulfan group.GPx values are found significantly low in Busulfan group when compared tocontrol group. It has been also observed that there is no significant differencebetween control group alpha lipoic acid group and ALA+BUS group. Whencompared to Busulfan group, GPx value is found significantly high in ALA+BUSgroup.Conclusion: According to our results, it has been been observed that Busulfanrises apoptose and causes testicle damage while Alpha Lipoic Acid has noprotective/curing effect on testicle damage when used with Busulfan.Key Word: Busulfan, Alpha Lipoic Acid, Testis