Sığır karaciğer alkali fosfatazının saflaştırılması fizikokimyasal ve kinetik özelliklerinin araştırılması

Abstract

46 ÖZET Bu çalışmada sığır karaciğerinden izole edilerek kısmen saflaştırılan alkali fosfatazın bazı fizikokimyasal ve kinetik özellikleri incelenmiştir. Önce enzimin p-nitrofenilfosfat substratı için Michaeüs-Menten ve Linewea- ver-Burk grafikleri çizilerek Km değeri hesaplanmıştır. Daha sonra sıcaklık, L-fe- nilalanin, üre, pH, fosfat, sefaleksin ve deney sıcaklığının alkali fosfataz aktivite- sine etkileri araştırılmıştır. Sığır karaciğerinden kısmen saflaştırılan alkali fosfatazın 56°C ve üzerinde ki sıcaklıklarda ısıya dayanıksız olduğu görülmüştür. Ortama eklenen üre ve fosfat enzimi inhibe etmektedir. Buna karşılık enzim aktivitesi sefaleksinden etki lenmemiştir. L-Fenilalaninin enzimi inhibe ettiği, fakat enzimin L-fenilalanine incebarsak ve plasenta izoenzimleri kadar hassas olmadığı tespit edilmiştir. Ayrıca L-feni- lalanin değişen p-nitrofenilfosfat konsantrasyonlarında enzimi nonkompetitif şe kilde inhibe ettiği görülmüştür. Sığır karaciğer alkali fosfatazı için optimal pH aralığı 10.0-10.9 arasında tespit edilmiştir. Enzim aktivitesi için en uygun deney sıcaklığının 37°C~40°C arası olduğu görülmüştür.

47 SUMMARY. In this study, some physicochemical and kinetic properties of partially purified alkaline phosphatase isolated from bovine liver has been examined. First, Michaeles-Menten and Lineweaver-Burk graphics were plotted and the Km value of the enzyme for p-nitrophenyl phosphate substrate was calculated. The effects of temperature, L-phenylalanine, urea, pH, phosphate, cephalexine and incubation temperature on the enzyme activity were studied. It was determined that alkaline phosphatase at 56°C and over 56°C was weak. Urea and phosphate which were added to the experiment inhibited the enzyme. On the other hand, enzyme activity was not effected by cefalexine. It was found that L-phenylalanine inhibited enzyme, but the enzyme wasn't as sensitive to L-phenyialanine as intestinal and placental enzymes. And, It was determined that L-phenylalanine inhibited enzyme noncompetitively in the the changable concentrations of p-nitrophenylphosphate. Optimum pH for bovine liver alkaline phosphatase was found between 10.0-10.9, and It was determined that the most suitable incubation temperature was between 37°C and 40°C.