Seruloplazminin roket immünelektroforeziyle tayini; bu yöntemin PPD oksidaz aktivite ölçümü yöntemi ve radyal immün difüzyon yöntemiyle karşılaştırılması

Abstract

ÖZET Bu çalışmamızda; bilgimize göre seruloplazmin miktar tayini için kullanılmayan roket immün elektroforezi tekniğini seruloplazmin miktar tayini için uygulamayı denedik. Bunun için Erciyes Üniversitesi Gevher Nesibe Tıp Fakültesi Hastanesi Kan Bankası'na verici olarak başvuran 30 sağlıklı yetişki ni çalışma grubu olarak kullandık. Elektroforez işleminin % l'lik agar içerisinde 1 /d/cm2 antikor içeren jel ile 2 mM kalsiyum laktat eklenmiş barbital tampon (iyonik kuvveti 0.07, pH 8.6) kullanılarak 5 V/ cm akım verilmek kaydıyle 1 6 saat süre ile yapılmasının uygun olacağını gözledik. EID yönteminin hassasiyetini ölçmek amacı ile, aynı örnekte 20 kez yapı lan ölçümler sonucu standart sapma (S^ 5.73 ve varyasyon katsayısı (CV)'nm da % 1.69 olduğunu saptadık. Aynı işlemi R1D yöntemi ile 20 kez yaptık ve standart sapmanın (Sr)) 1.89. ve varyasyon katsayısının (CV) % 0.66 olduğunu gözledik. Daha sonra 30 numunede PPD oksidaz, Radyal İmmün Difüzyon (R1D)34 ve Roket immün elektroforez (E1D) yöntemleri ile Cp düzeylerini tespit ettik. EID ve RID yöntemleri ile elde edilen değerlerin istatistiksel olarak karşılaş tırılması sonucu r=0.99 saptanarak, her iki yöntem arasında tam bir korelas yon bulunduğunu, böylece EID yönteminin Cp düzeyinin ölçümünde güveni lerek kullanılabileceği sonucuna vardık.

SUMMARY In this study; we tried to determine the quantity of ceruloplasmin (Cp) by Rocket immünoelectrophoresis technique which isn't used for Cp determinati on. We used to 30 healty adults are donors at Blood Bank of Erciyes Univer sity for working group. We observed that the proper conditions for this method were; using barbital buffer solution carrying 2 mM calcium lactat (ionic strength 0.07, pH 8.6), agar plates containing 1 jil/cm2 ceruloplasmin antibody and applying 5 V/cm current during the electrophoresis for 16 hours. In order to determine the sensitivity of EID technique we calculated standard deviation (SD) 5.73 and coefficient of variation (CV) 1.69 % using the same sample for 20 times. The same process was carried with RID method for 20 times and SD of 1.89, CV of 0.66 % were found. Afterwards we determined Cp levels of 30 serum samples by using PPD oxidase, Radial Immuno Diffusion (RID) and Rocket immuno electrophoresis (EID) methods. When the values obtained by EID and RID methods were36 compared statistically, it was found that r=0.99 and there was a complete corelation between the two methods. As the result of this study it is indicated that EID technique is a confident method for determination of Cp levels.