Warfarinin sitotoksik etkisinin K562 lösemik hücre soyunda çalışılması

Abstract

WARFAR N' N S TOTOKS K ETK S N N K562 LÖSEM KHÜCRE SOYUNDA ÇALIŞILMASIÖZETKanser hastalarında trombus oluşumunun fazla olması nedeniyle tedaviyi destekleyici olarakantikoagülanlar kullanılmaktadır. Klinik ve hayvan laboratuar çalışmaları antikoagülanlarındolaylı olarak primer tümörlerin ve metastazın gelişmesini önlediği belirtilmiştir. Vitamin Kantagonisti olan warfarinin de böyle bir etkisi olduğu bildirilmiştir. Bununla birlikte, ilacınkanser hücrelerinde doğrudan bir sitotoksik etkiye sahip olduğu da gösterilmiştir. Bu sitotoksiketkinin warfarinin elektron transfer etme özelliğiyle kanser hücrelerinde süperoksid ve hidrojenperoksid gibi reaktif oksijen türlerini arttırarak meydana geldiği önerilmektedir. Ancakliteratürde bu görüşle ilgili bir çalışma görülmemektedir. Bu çalışmada K562 lösemik hücresoyuna, farmakolojik dozların üstündeki farklı konsantrasyonlarda warfarin uygulanarak, ilacınoksidatif stres oluşturma potansiyeli ve buna bağlı olarak hücre sitotoksitesi oluşturma özelliğiaraştırıldı. Çalışmamızda eritrolösemik hücre soyu olan K562 hücreleri warfarinin farmakolojik(2-5µM) ve üstündeki dozlarda (50-200µM) 72 saat kültüre edildi. Hücre canlılığı tripan blue,hücre proliferasyonu MTT [3-(4,5-dimetiltiazol-2)-2,5-difenil tetrazolyum bromid] yöntemiyleve warfarinin K562 hücrelerinde oksidatif stres üzerine etkisi kemilüminesans ve 2',7' DCFH-DA (2', 7'-dichlorohidrofluorescindiasetat) ile değerlendirildi. Çalışmamızda apoptozgöstergesi olarak kabul edilen DNA fragmentasyonu, EL SA ve elektroforetik yöntemleri ilewarfarinin sitotoksik etkilerini göstermek amacıyla kullanıldı. Bulgularımız, farmakolojikkonsantrasyonun üzerindeki dozlarda warfarinin K562 hücrelerinde hücre içi oksidatif stresiartırdığı ve hücre çoğalmasını azalttığını göstermektedir. DNA fragmentasyonu üzerindekiçalışmalarda da yüksek konsantrasyonlarda ilacın sitotoksik bir etkiye sahip olduğusaptanmıştır.Anahtar kelimeler: Warfarin, K562, Kanser, Sitotoksite, Serbest Radikaller

EVALUATION OF EFFECT ON THE CELL CYTOTOXICITY OFWARFARIN IN LEUKEMIA CELL LINEABSTRACTIt is used anticoagülants as support treatment, because of being excessive of thrombus formationat cancer patients. At the studies of clinical and animal models laboratory, it was reported thatanticoagülants prevented indirectly development of primary tumors and metastasis. It wassuggested that warfarin, is being vitamin K antagonist, has also this effect. In addition to this, ithas been shown the drug may have a direct cytotoxic effect on malignant cells. It was suggestedthat this cytotoxic effect may be due to reactive oxygen species as superoxide and hydrogenperoxide produced in the malignant cells by warfarin, which is a potent electron transferringsubstance. However, it is not encountered any literature about this view. In this study, it wasexamined the potential of forming oxidative stres of drug and depending on this feature offorming the cell cytotoxicity by treating different concentrations of warfarin overpharmacological doses on K562 leukoemia cell line. We hava cultured K562 cells, areerythrolymphocyte cell line, pharmological (2-5µM) and higher doses (50-200µM) of warfarinfor 72 hours. It was evaluated cell viability by using trypan blue method, celll proliferation byusing MTT method and the effect of warfarin on oxidative stres of K562 cells by usingChemiluminescence and 2?,7? DCFH-DA method. In our study, DNA fragmentation consideredas apoptosis indication, we have used EL SA and electrophoretic methods for demostratingcytotoxic effects of warfarin. Our findings were shown that warfarin doses overpharmacological concantrations at K562 cells increased intracellular oxidative stres anddecreased cell proliferation. On the studies about DNA fragmentation, it was determinatedhigher concantrations of drug have a cytotoxic effect.Key Words : Warfarin, K562, Cancer, Cytotoxicity, Free Radicals