İnsan kan lenfositlerinde sitrininin mikronükleus sıklığı ve mitotik indeks üzerine etkilerinin araştırılması

Abstract

Mikotoksinler, insanlarda ve hayvanlarda hastalıklara ve ölüme sebep olabilen mikrofunguslartarafından oluşturulan ikincil metabolitlerdir.Bu çalışmada, insan periferal kan lenfositleri üzerinde mikotoksin sitrininin (CTN) genotoksik vesitotoksik etkileri çalışılmıştır. Altı sağlıklı sigara içmeyen bireyden (3 erkek ve 3 kadın) periferalkan örnekleri alınmış ve kültüre edilmiştir. Lenfosit kültürleri son 48 saat 10 µM, 20 µM, 40 µM,60 µM, 80 µM, 100 µM konsantrasyonlarda CTN, 0.1 µM konsantrasyonda mitomisin c (pozitifkontrol) ve absolu etanol ile muamele edilmiştir. Sitokinezi durdurmak için, kültürlere 44. saatte 3μg/ml son konsantrasyonda sitokalazin B (Cyt-B) eklenmiş ve 72. saatte kültürler sonlandırılmıştır.CTN, insan lenfositlerinde doza bağlı olarak mikronukleus (MN) frekansında önemli bir artışa vedoza bağlı olarak mitotik indeks (MI) oranlarında önemli bir azalmaya sebep olmuştur. CTN'in,sitokinezi bloke edilmiş lenfositlerde 60 µM, 80 µM, 100 µM konsantrasyonlarda MN oluşumunuartırdığı bulunmuştur (p=0.014). Tüm CTN konsantrasyonları, binükleer hücrelerin oranlarında veMI değerlerinde açık bir azalmaya yol açmıştır (p=0.014).Bu sonuçlar, kültüre edilmiş insan lenfositlerinde yüksek konsantrasyonlardaki CTN'in genotoksikve sitotoksik olduğuna işaret etmektedir.Anahtar Kelimeler: Sitrinin; Lenfosit; Mikronükleus; Mitotik indeks

Mycotoxins are secondary metabolites produced by micro fungi that are capable of causing diseaseand death in humans and other animals.In the present study, the mycotoxin citrinin (CTN) were evaluated for their genotoxic and cytotoxiceffects to human peripheral blood lymphocytes. Peripheral blood samples were obtained andcultured from six healthy non-smoking individuals (3 females and 3 males). Lymphocyte cultureswere treated for the last 48 h with CTN at the following concentrations, 10 µM, 20 µM, 40 µM, 60 µM, 80 µM, 100 µM, and 0.1 µM mitomycin c (positive control) and absolute ethanol. To block cytokinesis,at 44 h of incubation, cytochalasin-B (Cyt-B) was added to cultures to give a final concentration of 3 μg/ml,and harvested cells at 72 h.CTN caused a significant dose-dependent increase in micronucleus (MN) frequency and asignificant dose-dependent decrease in mitotic index rates in human lymphocytes. At the 60 µM, 80µM, 100 µM concentrations, CTN was found to induce MN in cytokinesis-blocked lymphocytes(p=0.014). The all CTN concentrations also led to a clear decrease in the percentage of binucleatedcells and mitotic index values (p=0.014).These results indicate that CTN at the high concentrations is genotoxic and cytotoxic in culturedhuman lymphocytes.Key words: Citrinin, Lymphocytes, Micronucleus, Mitotic index