Bazı hasta serumlarında, sınav stresi olan öğrenci serumlarında ve plevra sıvısında Zn2 miktarının apokarbonik anhidrazın tekrar aktivasyonu ile tayini

Abstract

ÖZET Bu çalışmada, bazı vücut sıvılarında eser miktarda bulunan Zn+2'nin kantitatif tayini için, geliştirilen enzimatik bir yöntem, modifîye edilerek bazı hastalık gruplarına ve plevra sıvısına uygulanmıştır. Apokarbonik anhidrazın enzimatik aküvitesmi çözeltideki Zn+2 miktarıyla orantılı olarak tekrar kazanması, enzimatik yöntemimizin temel prensibini oluşturmuştur. önce, sığır karbonik anhidraz enzimi, eritrosit hemolizatmdan afinite kromatografisi ile saflaştırıldı. Saflaştırılmış enzimin bünyesindeki Zn+2'nin tamamı piridin-2,6-dikarboksilik asit çözeltisine karşı diyaliz edilerek uzaklaştırıldı. Böylece %100 saflıkta apoenzim elde edildi. Serum ve plevra sıvısında 2n+2 tayini yapabilmek için standart bir eğri hazırlandı. Bu eğrinin hazırlanmasında ve numunelerin değerlendirilmesinde, pnitroferul asetat substratının p-nitrofenol ve asetata parçalanmasının, yani karbonik anhidrazın esteraz aktivitesinin ölçümü esas alındı. Tayinlerde serum ve plevra sıvısı, bir ön işlemden geçirildikten sonra kullanıldı. Elde edilen sonuçlar, aynı numunelerin atomik absorbsiyonla ölçülen toplam Zn+2 miktarlarıyla karşılaştırıldı. Ayrıca sadece total protein çalışılan plevra sıvısı haricindeki diğer bütün serum numuneleri için, total protein ve albümin ölçümleri yapılmış ve Zn+2 miktarları ile arasındaki ilişki araştırılmıştır. Çalışılan 20 sağlıklı, 10 sirozlu, 12 diabetes mellituslu, 15 kronik böbrek, 101 sınav stresli öğrenci serumu ve 10 plevra sıvısı için apokarbonik anhidraz yöntemiyle bulunan X±SD değerleri sırasıyla, 123,4±20,8, 51,5±14,7, 115,6±21,7, 106,4±21,1, 97,9±19,7 ve 88,4+22,0 ug/100 ml'dir. Aynı sırayla atomik absorbsiyonla ölçülen Zn+2 değerleri ise ; 129,0±12,2, 51,0±14,1, 118,4±22,7, 106,8±22,3, 100,0±20,3, ve 90,0+22,0 ug/100 ml'dir. Bütün gruplar için enzimatik yöntem ve atomik absorbsiyon yöntemiyle elde edilen Zn+2 değerleri arasında korelasyon hesabı yapılarak, çok önemli derecede (P<0,001) korelasyon tespit edilmiştir. Bu sonuçlar, literatürdeki değerlerle karşılaştırılmış, yöntemimizin vücut sıvılarında kullanılabileceği kanaatine varılmıştır.

n SUMMARY In this study, in order to determine the zinc found in trace amounts in some body fluids, a new, modified, enzymatic method has been used. It is the principle of the method that apocarbonic anhydrase regains its activity by means of Zn+2 present in the solution, thus, the higher the Zn+2 concentration in the solution, the more activated the enzyme in the medium. For this purpose, bovine carbonic anhydrase was purified from erythrocyte hemolysate by affinity chromatography. The Zn+2 bound to the purified enzyme was removed by dialysis againts the solution of pyridine-2,6-dicarboxylic acid, resulting in highly purified enzyme (100%). For quantitative determination, a standart curve was obtained by using the conversion of p-nitrophenyl acetate to p-nitrophenol and acetate (determination of esterase activity of the enzyme). The samples were subjected to a preanalytic procedure and their zinc content were analyzed with both methods : enzymatic and atomic absorbtion. The total protein and albumin levels of all samples were determined and their correlation with Zn`1`2 concentrations was investigated. For the controls (N=20) and the patients (cirrhosis, N=10 ; diabetes mellitus, N=12 ; chronic renal failure, N=15, students with examination stress, N=101), the following, two series of concentrations were obtained respectively: 123,4±20,8, 51,5±14,7, 115,6+21,7, 106,4±21,1, 97,9±19,7 and 88,4±22,0 with enzymatic method and 129,0±21,2, 51,0±14,1, 118,4±22,7, 106,8±22,3, 100,0±20,3 and 90,0±22,0 ug/dL with atomic absorbtion. The regression analysis of the results of the two methods showed a good correlation (P<0,001). On the basis of the previous studies and of. the present one, it was concluded that this enzymatic method can be used as a convenient method for the determination of Zn+2 in various body fluids.